EMSA实验的原理是基于DNA结合蛋白与DNA的特异性结合，依据实验需要，设计标记探针、非标记探针、蛋白特异性抗体等参照物，通过电泳迁移率的变化来进行定性和定量分析，钟鼎生物提供的EMSA实验（凝胶/电泳迁移率实验）基于生物素标记探针与对应的DNA结合蛋白的特异性结合，设计合理、科学的实验方案，为客户提供验证性的EMSA，竞争性的EMSA以及超迁移EMSA(Super-shift EMSA）实验服务。
| EMSA服务 | ||
|---|---|---|
| 服务编号 | 服务说明 | 服务报价 |
| 5'生物素（biotin)探针合成 | 合成生物5'生物素（biotin）探针 | 在线询价 |
| 验证性EMSA | 验证生物素标记探针与结合蛋白互作的EMSA | |
| 竞争性EMSA | 生物素标记探针、非标记探针与结合蛋白互作的EMSA | |
| 超迁移EMSA（Super-Shift-EMSA) | 特异性抗体进一步鉴定探针与蛋白结合物的EMSA | |
说明：选择Super-Shift-EMSA的客户需提供特异性的抗体，为满足部分客户的特殊实验要求，本公司同时可提供基于Dig（地高辛）探针法的EMSA实验方案。
客户提供实验材料
1、细胞核蛋白或纯化的转录因子，部分实验亦可使用重组表达的蛋白，依据实验设计每张膜至少提供50ul，浓度大于0.5mg/ml
2、探针序列，如无探针序列，请提供DNA结合蛋白相关信息或相关文献，便于钟鼎生物技术人员设计探针
3、结合蛋白特异性抗体50ul以上，浓度大于0.5mg/ml
EMSA实验流程
1、泳道设定及浓度梯度实验设计
2、5'生物素探针设计及合成
3、EMSA电泳凝胶配置
4、EMSA反应
5、EMSA反应物电泳检测
6、显色反应
7、实验分析及报告撰写
EMSA服务发货文件
1、实验合成生物素标记探针
2、非标记探针（竞争法EMSA）
3、剩余目的蛋白和抗体
4、标准实验流程报告
5、原始实验图片及数据
6、如果是实验有额外的要求，请提前致电或邮件说明
部分客户发表文章：
1、AKT-FoxO1-PCK/ChREBP signaling pathway regulates metabolic liver disease induced by high glucose in largemouth bass
DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2025.139703(IF=7.7)
2、MYC2 regulates stomatal density and water use efficiency via targeting EPF2/EPFL4/EPFL9 in poplar
DOI: 10.1111/nph.19531(IF=9.4)
文章解读
2021年6月15日，New Phytologist在线发表了中国科学院南京土壤研究所/土壤与农业可持续发展国家重点实验室施卫明团队完成的题为“WRKY46 promotes ammonium tolerance inArabidopsis by repressing NUDX9 and IAA-conjugating genes and by inhibiting NH4+ efflux in the root elongation zone”的研究论文。该研究发现拟南芥WRKY46转录因子通过整合调控蛋白N-糖基化和游离型IAA含量来抑制根伸长区NH4+的外流，以增强对铵毒的耐受性。其中的EMSA项目由钟鼎生物协助完成。
本文主要结果：
1.WRKY46参与拟南芥根的高NH4+响应
本研究利用NH4+处理和非处理的拟南芥根系为材料进行RNA-seq检测和分析，结果发现多个WRKY转录因子家族的转录水平受到明显诱导，其中，WRKY46对NH4+响应最灵敏。pWRKY46::GUS染色结果显示，高NH4+诱导根中，尤其是根尖部位WRKY46的上调。敲除及过表达株系表型分析表明，WRKY46主要在根EZ部位发挥功能，并正调控高NH4+条件下的PR生长。
2.WRKY46通过蛋白质N-糖基化来稳定NUDX9以抑制NH4+外流
已有研究表明伸长区NH4+通量的增加是与NH4+胁迫下主根生长抑制相关的关键特征之一。为检测WRKY46对高NH4+条件下主根生长的促进是否与NH4+通量调节有关，对不同遗传材料（野生型、WRKY46突变体及过表达材料）根系分生区和伸长区的NH4+净通量进行检测，结果发现WRKY46负调控根伸长区NH4+的外流。
已知GDP-甘露糖焦磷酸化酶（NUDX9）通过调节蛋白N-糖基化而参与调控高NH4+下的主根生长。本研究通过ChIP-qPCR、Y1H、EMSA及LUC活性检测发现，WRKY46直接与NUDX9启动子结合并负调控该基因的转录。随后对不同遗传材料根NH4+通量及糖基化水平的检测表明NUDX9作用于WRKY46下游并参与WRKY46依赖的高NH4+响应，但该过程还包含其他下游靶基因的参与。
3.游离IAA参与伸长区部位WRKY46介导的NH4+外流抑制
研究显示，高NH4+下的主根生长抑制与生长素吲哚-3-乙酸（IAA）有关联，且WRKY46参与调控渗透/盐胁迫下根中IAA的含量。通过pDR5::GUS检测发现，WRKY46表达差异所导致的NH4+敏感性差异与游离IAA含量有关。进一步实验结果显示，WRKY46直接与IAA结合基因（GH3.1、GH3.6、UGT75D1、UGT84B2）的启动子结合并抑制它们的转录，从而正调控游离IAA含量以抑制根伸长区NH4+外流。此外，进一步通过IAA外源处理检测发现，蛋白N-糖基化抑制的NH4+外流部分依赖于IAA含量。
综合所述，在高NH4+条件下，NH4+可诱导拟南芥中WRKY46转录因子的表达。随后，WRKY46直接与GH3.1、GH3.6、UGT75D1和UGT84B2基因启动子结合并抑制它们的表达，从而维持游离态IAA含量和初生根的生长。与此同时，WRKY46通过抑制NUDX9转录以稳定蛋白质N-糖基化水平，由此IAA生物合成酶在N-糖基化后保持稳定，IAA在高NH4+条件下的生物合成也随之增加。升高的游离IAA可诱导IAA结合基因的转录，而这与WRKY46的转录抑制间接相关（图1）。总之，WRKY46通过抑制IAA结合和蛋白质N-糖基化来维持IAA稳态，是培育高NH4+耐受作物品种的宝贵遗传资源。
图1. WRKY46响应高铵胁迫模式图
中科院南京土壤所施卫明团队的李光杰副研究员为本文的通讯作者，助理研究员狄东伟为本文第一作者，已出站博士后孙丽，副研究员王萌，已毕业博士生吴晶晶，中科院遗传发育所的褚金芳老师和房爽老师以及墨尔本大学的Herbert J. Kronzucker教授也参与该项研究。该工作得到包括国家自然科学重点项目、青年基金项目及江苏省杰青等经费的支持。
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