酵母单杂交系统

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酵母单杂交系统:蛋白与DNA互作

酵母单杂交技术是由Li等从酵母双杂交技术发展而来的(1993年),是根据DNA结合蛋白(即转录因子)与DNA顺式作用元件结合调控报告基因表达的原理,克隆与靶元件特异结合的转录因子基因的有效方法。

酵母单杂交系统

酵母单杂交的应用:
• 确定已知DNA—蛋白质之间是否存在相互作用;
• 筛选结合于目的顺式调控元件或其他短DNA序列的新基因;
• 确定蛋白结合DNA的结构域,准确定位与DNA结合的蛋白序列。

酵母单杂交的缺点:
• 由于插入的靶元件与酵母内源转录激活因子可能发生相互作用,或插入的靶元件不需要转录激活因子就可以激活报告基因的转录,因此往往产生假阳性结果。
• 如果酵母表达的AD融合蛋白对细胞有毒性,或融合蛋白在宿主细胞内不能稳定地表达,或融合蛋白发生错误折叠,或者不能定位于酵母细胞核内,以及融合的Gal4AD封闭了蛋白质上与DNA相互作用的位点,则都可能干扰AD融合蛋白结合于靶元件的能力,从而产生假阴性结果。

酵母单杂交流程

酵母单杂交流程

文库建立和文库筛选

验证

互作验证

互作验证

酵母单杂交服务项目 QQ技术支持

服务内容 客户需提供 交付结果
文库筛选 1、诱饵基因序列或诱饵质粒
(pHis2-Bait或pAbAi-Bait);
2、文库质粒(不少于50ug AD文库质粒/每次筛库)
(客户最好能提供文库质检相关信息:如物种、库容、文库滴度、文库cDNA片段大概的大小等)
1、质粒在受体菌的阳性菌
2、提供详细的、完整的实验报告,清晰的实验图片
3、筛选结果的测序结果和质粒
蛋白-蛋白点对点互作验证 1、pHis2-Bait或pAbAi-Bait和AD-prey质粒
2、或者Bait和Prey序列,质粒由我们构建
1、提供详细的、完整的实验报告,清晰的实验图片
2、在受体菌的阳性菌
自激活和毒性验证 1、pHis2-Bait或pAbAi-Bait质粒
2、或者Bait序列,质粒由我们构建
酵母质粒提取和测序 酵母菌液或者具有菌斑的平板 1、提供详细的、完整的实验报告
2、筛选结果的测序结果和质粒