Western Blot检测（蛋白印迹杂交）

Western Blot（蛋白印迹杂交）又称免疫印迹(immunoblotting)，是利用抗原抗体反应，进行蛋白检测的常用方法之一。Western Blot方法非常成熟，大多实验室均具备Western Blot的实验能力。但是要得到一份背景清晰、条带明亮、真实客观的实验结果，需要投入大量的时间和精力，钟鼎生物技术人员，在样品处理、转印和抗体稀释比例等操作上具有特殊的技巧，能够为客户的样品量身定制实验方案。

服务优势

一站式服务	质量保证	经验丰富	订单查询
完善的一站式服务体系， 提供WB保证型抗体定制服务	ISO9001认证，高质量的 实验结果交付	在样品处理、转印和抗体 稀释比例上有着独到理解	微信查询订单进度， 实验最新进展一手掌握

Western Blotting实验周期与费用

Western Blot检测技术服务
服务编号	服务项目	周期	报价
BA401	Western Blot检测技术服务	1-2周	询价
BA402	Western Blot检测技术服务（含内参）	1-2周	询价
BA403	Western Blot检测技术服务（含内参均一化）	1-2周	询价
用户需自己提供一抗，或由钟鼎生物代购。我们免费提供标记二抗和内参抗体α-Tublin，β-actin，GAPDH。

Western Blot实验流程

1、蛋白质抽提
A、实验对象为组织样品，取适量（250-500mg）新鲜组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白。
B、实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白。 
2、蛋白质定量
按KCTMBCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE) 
将准备好的样品液和生物素标记的蛋白质分子量标准分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
4、蛋白质转移到硝酸纤维膜或PVDF膜
5、膜的封闭和抗体孵育
A、膜在5％BSA溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。
B、封闭过的膜加入一级抗体室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。 
C、加入HRP标记的二级抗体以结合一级抗体及HRP标记的抗生物素抗体以结合分子量标准，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗体可同时检测GAPDH含量。
6、结果检测
化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显影。图片扫描保存为电脑文件，并用ImageJ分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7、数据分析
目的蛋白的灰度值除以内参GAPDF的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8、提供实验报告
包括详细的实验方法及Western Blot实验结果。

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