iTRAQ、TMT标签介绍

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iTRAQ、TMT标签介绍

  iTRAQ和TMT都是等重同位素标签,分别由AB SCIEX和Thermo Fisher两家公司开发,这两种标签标记肽段的原理是一样的,因此使用iTRAQ和TMT标签定量蛋白是属于同一类定量方法。

1.1 iTRAQ标签与TMT标签的结构简式

  iTRAQ标签与TMT标签都由报告基团、平衡基团以及肽反应基团组成,报告基团和平衡基团通过加入同位素分子的量和种类来调节重量,每种标签的报告基团和平衡基团的总重量是一定的,这就构成了等重标签。

1.2 iTRAQ标签与TMT标签的比较

标签类 iTRAQ TMT
生产商 AB SCIEX Thermo Fisher
标记规格 4 标、 8 标 2标、6标、10标
标记通量 8个样品 10个样品

2. iTRAQ、TMT标签标记肽段过程

  同位素标签标记肽段时,肽段的N端氨基与肽反应基团发生置换反应,使等重标签共价交连到肽段N端。

3. iTRAQ/TMT相对定量原理

  当样品蛋白被水解后,加入等量的标签,不同同位素在标记同一多肽后,分子量完全相同,在第一级质谱检测时同一多肽被分离出来,用串联质谱方法对在第一级质谱检测到前体离子进行碰撞诱导解离,通过第二级质谱时被标记的多肽与平衡基团、平衡基团与报告基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,产生低质荷比(m/z)的报告离子。

  iTRAQ/TMT相对定量技术流程
a. 将蛋白样品酶解消化成多肽片段;
b. 使用等量不同的标签标记不同多肽样品,样品中同一肽段被标记后的重量是一致的;
c. 取等量的标记样品混合;
d. 被标记的多肽片段经过一级质谱分离,在一级质谱中,由于标签总质量数一样,来自不样品中的相同肽段不会被分开,便可以一起进入二级质谱分析;
e. 在二级质谱中,在高能碰撞下标签的平衡基团与报告基团之间的键被打断,基团释放出来,各个报告基团在质谱中的信号强度则代表了多肽在不同样品中的丰度。与此同时,肽段碰撞碎裂成二级碎片,通过分析肽段的氨基酸序列,可以推测对应的蛋白质的序列,对蛋白进行定性分析。