雨生红球藻酵母双杂交文库（特色资源）| Gateway技术构建

知识产权与授权声明
本文库由钟鼎生物基于客户样本构建，版权及相关知识产权归原始建库客户所有。目前平台展示该文库信息仅为促进科研合作与资源共享。任何单位或个人如需使用本文库进行筛选或商业应用，须通过钟鼎生物与原建库客户协商并签署授权协议。如有合作意向，请联系我们获取授权支持。

1.28×10⁷

次级文库库容 (CFU)

满足下游筛选需求

100%

次级文库重组率

24/24克隆为阳性插入

>1000 bp

平均插入片段长度

覆盖全长cDNA范围 0.1–4 kb

1.44×10⁷

初级文库库容 (CFU)

初级重组率95%

文库质量总览

基于 Invitrogen Gateway® 技术构建，无PCR偏好性，完整保留转录组信息

✅ 文库构建结论：本实验以雨生红球藻为起始材料，成功构建核体系酵母双杂交文库。经全面质控：初级文库库容 1.44×10⁷ CFU，重组率95%；次级文库库容 1.28×10⁷ CFU，重组率100%；电泳检测平均插入片段长度 >1000 bp；随机挑取克隆测序，物种来源均为雨生红球藻（Haematococcus pluvialis），无外源污染。各项指标均达到高质量文库标准，可用于下游酵母双杂交筛选及微藻功能基因组学研究。

适用方向：虾青素生物合成调控、微藻逆境适应机制、光合作用与代谢网络研究。

关键实验步骤与质控数据

完整流程包括 RNA提取 → mRNA分离 → ds cDNA合成 → BP重组建初级库 → LR重组建次级库

Total RNA & mRNA 质检

图1 Total RNA 电泳图 (M: Marker 2000, Lane 1: RNA样品)
28S/18S清晰，完整性良好

图2 mRNA 分离结果 – 弥散条带最亮区>1000bp，质量合格

提取总量＞300 μg Total RNA，mRNA富集效果理想，满足建库要求。

ds cDNA 合成 & 分级分离

图3 双链cDNA电泳 – 弥散条带集中于0.1~4 kb，覆盖全长信息

采用SMARTer技术避免PCR扩增偏差，cDNA经分级柱收集，确保大片段富集。

初级文库库容 & 重组率鉴定

图4 初级文库库容量平板 (Kan抗性) – 单克隆计数1800/稀释板，计算库容1.44×10⁷

图5 初级文库重组率电泳 – 23/24克隆插入片段，重组率95%，平均片段>1000bp

次级文库库容 & 重组率鉴定

图7 次级文库库容量平板 (Amp抗性) – 库容1.28×10⁷ CFU

图8 次级文库重组率 – 24/24阳性，重组率100%，插入片段>1000bp

随机克隆测序验证（物种来源 & 插入真实性）

图6 初级文库测序Blast结果 – 6个克隆均为雨生红球藻来源

图9 次级文库测序Blast结果 – 与雨生红球藻基因组高度匹配，无污染

通过随机挑取克隆进行Sanger测序，进一步证实文库具有高度的物种特异性和序列多样性，可用于筛选真实互作蛋白。

完整质控参数

依据严格质控标准，每一份文库均提供可追溯数据

质控项目	初级文库 (pDONR222)	次级文库 (pGADT7-DEST)
库容量 (CFU)	1.44 × 10⁷	1.28 × 10⁷
重组率	95% (23/24)	100% (24/24)
平均插入片段长度	>1000 bp	>1000 bp
插入片段范围	0.1 – 4 kb (弥散分布)
随机测序正确率	6/6 均为雨生红球藻来源，无空载或污染
转化方法	电转化 DH10B 感受态
载体抗性	Kanamycin	Ampicillin
适用筛选方法	共转化 / mating 筛选

※ 所有质控数据均存档于原始实验报告中，可提供完整电泳图谱及测序原始文件。

钟鼎生物特色文库平台优势

稀有资源 + 知识产权合规化运营

严格质控体系

每一批文库均进行库容、重组率、插入片段、随机测序四重质控，确保交付即用。

知识产权合规合作

特色文库均需通过授权机制使用，平台提供对接服务，确保合法合规。

一站式互作服务

从文库筛选、点对点验证（酵母回转、Co-IP、Pull-down、BiFC）到下游功能分析，无缝衔接。

丰富物种经验

已完成昆虫、水生生物、药用植物、微藻等稀有物种文库200+，成功率>99% 。

雨生红球藻 (Haematococcus pluvialis) 酵母双杂交文库