1.04×10⁷
次级文库库容 (CFU)
远超常规筛选需求 (≥1×10⁶)
100%
重组率
24/24克隆均为阳性插入
>1000 bp
平均插入片段长度
覆盖全长cDNA范围 0.1–4 kb
100%
物种来源正确率
5/5 测序比对均为拟南芥
文库质量总览
基于 Invitrogen Gateway® 技术构建，无PCR偏好性，完整保留转录组信息
✅ 文库构建结论：本实验以拟南芥全株混合样本为起始材料，成功构建核体系酵母双杂交文库。经全面质控：初级文库库容 1.44×10⁷ CFU，次级文库库容 1.04×10⁷ CFU；初级与次级文库重组率均为 100%；电泳检测平均插入片段长度 >1000 bp；随机挑取克隆测序，物种来源均为拟南芥（Arabidopsis thaliana），无外源污染。各项指标均达到高质量文库标准，可放心用于下游酵母双杂交筛选及互作蛋白鉴定。
适用方向：蛋白互作网络筛选、信号转导机制、植物发育/胁迫响应调控因子互作研究。
关键实验步骤与质控数据
完整流程包括 RNA提取 → mRNA分离 → ds cDNA合成 → BP重组建初级库 → LR重组建次级库
Total RNA & mRNA 质检
图1 Total RNA 电泳图 (M: Marker 2000, Lane 1: RNA样品)
28S/18S清晰，完整性良好
28S/18S清晰，完整性良好
图2 mRNA 分离结果 – 弥散条带最亮区>1000bp，质量合格
提取总量＞300 μg Total RNA，mRNA富集效果理想，满足建库要求。
ds cDNA 合成 & 分级分离
图3 双链cDNA电泳 – 弥散条带集中于0.1~4 kb，覆盖全长信息
采用SMARTer技术避免PCR扩增偏差，cDNA经分级柱收集，确保大片段富集。
初级文库库容 & 重组率鉴定
图4 初级文库库容量平板 (Kan抗性) – 单克隆计数1800/稀释板，计算库容1.44×10⁷
图5 初级文库重组率电泳 – 24/24克隆均插入片段，重组率100%，平均片段>1000bp
次级文库库容 & 重组率鉴定
图7 次级文库库容量平板 (Amp抗性) – 库容1.04×10⁷ CFU
图8 次级文库重组率 – 24/24阳性，100%重组，插入片段>1000bp
随机克隆测序验证（物种来源 & 插入真实性）
图6 初级文库测序Blast结果 – 5个克隆均为拟南芥来源
图9 次级文库测序Blast结果 – 与拟南芥基因组高度匹配，无污染
通过随机挑取克隆进行Sanger测序，进一步证实文库具有高度的物种特异性和序列多样性，可用于筛选真实互作蛋白。
完整质控参数
依据严格质控标准，每一份文库均提供可追溯数据
| 质控项目 | 初级文库 (pDONR222) | 次级文库 (pGADT7-DEST) |
|---|---|---|
| 库容量 (CFU) | 1.44 × 10⁷ | 1.04 × 10⁷ |
| 重组率 | 100% (24/24) | 100% (24/24) |
| 平均插入片段长度 | >1000 bp | >1000 bp |
| 插入片段范围 | 0.1 – 4 kb (弥散分布) | |
| 随机测序正确率 | 5/5 均为拟南芥来源，无空载或污染 | |
| 转化方法 | 电转化 DH10B 感受态 | |
| 载体抗性 | Kanamycin | Ampicillin |
| 适用筛选方法 | 共转化 / mating 筛选 | |
※ 所有质控数据均存档于原始实验报告中，可提供完整电泳图谱及测序原始文件。
钟鼎生物文库平台优势
高质量保证 + 知识产权合规化运营
严格质控体系
每一批文库均进行库容、重组率、插入片段、随机测序四重质控，确保交付即用。
知识产权合规合作
所有文库均获得原始建库客户授权，提供分成合作模式，合法共享，尊重创新。
一站式互作服务
从文库筛选、点对点验证（酵母回转、Co-IP、Pull-down、BiFC）到下游功能分析，无缝衔接。
丰富物种经验
已完成棉花、水稻、玉米、大豆、拟南芥、烟草、番茄、人、对虾等200+物种文库，成功率>99% 。
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