磷酸化是最常见的蛋白翻译后修饰之一，简单来说，就是在蛋白质或其他分子上添加一个磷酸基团（PO4）的过程。这个看似简单的操作，却能够短时间改变蛋白质的性质和功能。想象一下，一个原本默默无闻的蛋白质，在经过磷酸化之后，摇身一变成为调控细胞生长、分裂、代谢等关键过程的指挥官。
我们复习一下磷酸化的概念，蛋白质的磷酸化是指由蛋白激酶（protein kinase, PK）催化的把 ATP 或 GTP γ 位的磷酸基转移到底物蛋白质的氨基酸残基上的过程。其逆转过程是由蛋白磷酸酶（protein phosphatase, PPase）催化的，称为蛋白质的脱磷酸化（去磷酸化）。
(1)Western Blot（WB）
原理：Western Blot是定性检测蛋白磷酸化水平的金标准,且大部分实验室具备开展这项实验的条件。它利用SDS-PAGE将总蛋白按照不同的分子量大小进行分离，然后将胶上的蛋白质转移到膜上，再利用特异性磷酸化抗体检测。
特点：
灵敏度高：许多磷酸化抗体尤其是Tyr磷酸化抗体检测灵敏度高。
特异性好：可以识别特定的磷酸化位点，但特异性磷酸化抗体难以制备，导致许多特异性位点的磷酸化检测受限。
局限性：市面上可能没有成品的磷酸化抗体，定制的话又费时费力。
(2)质谱（MS）
原理：先通过SDS-PAGE或者2D-PAGE胶等分离目标蛋白，切下目标蛋白，并用蛋白酶消化以产生肽段混合物，利用亲和纯化技术富集磷蛋白和磷酸肽，LC-MS/MS检测分析蛋白序列和相应位点的磷酸化修饰。
特点：
全面评估：适用于复杂的生物样品中蛋白质磷酸化的全面评估（磷酸化蛋白质组学）。
高灵敏度：能够检测低丰度的磷酸化蛋白。
高分辨率：可以识别新的磷酸化事件和蛋白质亚型。
| 服务流程 | 交付数据或材料 | 周期 | 价格 |
| 步骤一、原核蛋白表达（蛋白底物） | 询价 | ||
| 1、表达质粒构建 2、原核蛋白表达及纯化 |
1、质粒及克隆菌株 2、蛋白底物（该服务不交付纯化后蛋白） 3、实验报告 |
2~3周 周期依据基因长度调整 |
|
| 步骤二、体外磷酸化 | |||
| 3、构建体外磷酸化反应体系 4、sds-page检测 |
4、实验报告 | 1-2周 | |
| 步骤三、磷酸化检测 | |||
| 5、磷酸化抗体WB检测 | 5、实验报告 （最终的WB图片，可以依据文章要求，自定义泳道排布） | 1~2周 | |
文献一：PKCβII phosphorylates ACSL4 to amplify lipid peroxidation to induce ferroptosis
发表杂志：Nature Communications
影响因子：15.7
这篇文献发现了小麦分蘖调控新机制：一个名为TaNHLP1的蛋白通过"招募"ABA信号通路的关键组分TaRACK1A，动态调控小麦分蘖。文章的核心发现之一是揭示了TaRACK1A通过磷酸化修饰来调控其功能，从而影响ABA信号通路和最终的分蘖数。磷酸化是这一调控机制中的关键分子开关。
该研究通过Y2H、LCI和Co-IP实验证实了TaNHLP1-A能与ABA信号通路的核心组分TaSnRK2-1A（激酶）和TaPP2C-7A（磷酸酶）直接相互作用。这一发现至关重要，因为它将TaNHLP1-A直接定位为ABA信号通路的下游效应蛋白，使其成为激酶和磷酸酶共同作用的“战场”。研究进一步发现，在ABA缺失时，TaPP2C-7A能够直接去除由TaSnRK2-1A施加在TaNHLP1-A蛋白上的磷酸化修饰。这揭示了一个超越经典模型的、更为直接的调控层级：TaPP2C-7A不仅通过抑制TaSnRK2-1A的活性来间接防止TaNHLP1-A被磷酸化，更能主动地“纠错”，直接移除已存在的磷酸化标签，确保了信号关闭的彻底性。
图1.ABA通路核心元件影响TaNHLP1的蛋白稳定性
这一精妙的磷酸化与去磷酸化动态过程直接调控了TaNHLP1-A的蛋白质稳定性：磷酸化促使其降解，而去磷酸化则使其稳定。具体而言，磷酸化扮演了“降解信号”的角色，可能通过吸引泛素连接酶，启动蛋白酶体降解途径，迅速降低TaNHLP1-A的胞内水平；反之，去磷酸化则保护了该蛋白，使其得以积累。这种对蛋白丰度的转录后调控，将ABA信号通路的状态（开启/关闭）直接转化为TaNHLP1蛋白水平的升降（减少/增加），从而精确控制分蘖的发生与否。这种机制的优势在于其快速和可逆性，使植株能够无需经历漫长的转录与翻译过程，即可对ABA的波动做出即时反应，实现对分蘖这一重要农艺性状的精准微调。
图2.NHLP1-RACK1A模块通过ABA信号通路调控分蘖的可能工作模型
文献二：PKCβII phosphorylates ACSL4 to amplify lipid peroxidation to induce ferroptosis
发表杂志：Nature Cell Biology，2022
影响因子：17.728
文献三：NLRP4E regulates actin cap formation through SRC and CDC42 during oocyte meiosis
发表杂志：Cellular & Molecular Biology Letters
影响因子：9.2
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