ADA 多克隆抗体，是抗体药物免疫原性评价中的"标尺"。ADA（Anti-Drug Antibody，抗药抗体）是机体针对治疗性抗体药物产生的免疫应答产物，ADA 检测是抗体药物研发和临床评价的核心环节。而高质量的 ADA 多克隆抗体，则是建立 ADA 检测方法、评估药物免疫原性的关键试剂。本文介绍 ADA 兔多克隆抗体的制备方案，分两个阶段：第一阶段完成 F(ab')2 动物免疫与筛选方法的建立与验证，第二阶段完成抗 CDR 区 ADA 多克隆抗体的亲和纯化。
- 方案概述：两阶段制备逻辑
- 项目进度与里程碑
- 阶段一（M1）：F(ab')2 动物免疫与筛选方法的建立与验证
- 阶段二（M2）：抗 CDR 区 ADA 多克隆抗体的亲和纯化
- 质控指标与交付内容
- 常见问题解答（FAQ）
本方案将 ADA 兔多克隆抗体的制备分为两个阶段：阶段一（M1）完成 F(ab')2 动物免疫与筛选方法的建立与验证，阶段二（M2）完成抗 CDR 区 ADA 多克隆抗体的亲和纯化。两阶段之间设置 GO/NO-go 决策点，确保进入下一阶段的原料质量可靠。
与效价评估
决策点
与质控
| 里程碑 | 关键节点 | 决策标准 |
|---|---|---|
| M1 中期 | 完成 4 次免疫、血清收集 | ELISA 效价初步评估 |
| M1 结束 | 800 ml 效价达标兔血清 | 效价 >10 万倍稀释度 → GO |
| M2 小试 | 40 ml 抗血清亲和纯化 | 确定抗体得率，评估可行性 |
| M2 结束 | 全部血清纯化与质控 | 纯度、效价、交叉反应全部达标 |
完成动物免疫；建立可行的筛选方法；完成兔子的血清效价评估，做出 GO/NO-go 决定。
由钟鼎生物进行酶切纯化制备 F(ab')2。
动物免疫：20 只新西兰兔，免疫 4 次；ELISA 测定血清效价评估；抗 F(ab')2 血清的收集（20×40 ml = 800 ml）。
（1）免疫后血清效价大于 10 万倍稀释度（间接 ELISA）；（2）制备 800 ml 效价达标兔血清。
2-3 个月。
M1 阶段性报告包含免疫流程、血清提取及效价检测数据。
抗原亲和纯化获得大于 10 mg 抗 CDR 区 ADA 多克隆抗体。
同型对照 IgG。
（1）先利用抗血清 40 ml 进行抗原亲和纯化小试确定抗体得率；最终全部血清进行抗原亲和纯化；（2）同型对照 IgG 亲和吸附；（3）纯化抗体生物学特性分析：SDS-PAGE 分析抗体纯度、BCA 检测抗体浓度及总产量、间接 ELISA 检测抗体效价。
抗体纯度＞90%；抗体效价＞10 万倍稀释度；特异性识别 CDR 区；与同型对照 IgG 交叉反应＜2%。
1-2 周。
M2 报告：抗原亲和纯化获得大于 10 mg 抗 CDR 区 ADA 多克隆抗体；抗体发货 COA 文件。
- 免疫流程——20 只新西兰兔、4 次免疫记录
- 血清提取——800 ml 抗 F(ab')2 兔血清
- 效价检测数据——间接 ELISA 效价结果
- GO/NO-go 评估——是否进入 M2 的决策依据
- 抗 CDR 区 ADA 多抗——＞10 mg
- SDS-PAGE 纯度报告——纯度＞90%
- BCA 浓度与总产量——浓度及总产量数据
- 间接 ELISA 效价——＞10 万倍稀释度
- 交叉反应检测——与同型对照 IgG ＜2%
- COA 文件——随抗体发货提供
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