磷酸化多抗制备案例

1、实验目的

以客户在钟鼎制备的磷酸化多肽抗原，偶联KLH免疫rabbit获得磷酸化多克隆抗体。

2、实验设计

（1） 以客户提供的目的序列设计免疫用多肽序列，合成非磷酸化多肽和磷酸化多肽，多肽偶联KLH；
（2） 磷酸化多肽免疫2只rabbit；
（3） 磷酸化多克隆抗体纯化

3、多肽合成

3.1、非磷酸化多肽HPLC检测结果

Sample ID:	ZD2018D00XXXX
Sequence:	XXXXXXXXXXXX-C
Column:	4.6mm*250mm, GS-120-5-C18-BIO
Calculation Type:	Percent
Solvent A:	0.1% Trifluoroacetic in 100% Acetonitrile
Solvent B:	0.1% Trifluoroacetic in 100% water
Gradient:	A	B
	0.00min 20%	80%
	25min  45%	55%
	25.1min 100%	0%
	30min  stop

3.2、非磷酸化多肽MS分析结果

MW:	1380.59	Probe bias:	-3.5kv
Probe:	ESI	Detector:	1.0kv
DL:	-20.0v	T.Flow:	0.2ml/min
DL Temp:	250℃	B.conc:	50%H2O/50%ACN
Block Temp:	200℃

3.3、磷酸化多肽HPLC分析结果

3.4、磷酸化多肽MS检测结果

MW:	1460.57	Probe bias:	-3.5kv
Probe:	ESI	Detector:	1.0kv
DL:	-20.0v	T.Flow:	0.2ml/min
DL Temp:	250℃	B.conc:	50%H2O/50%ACN
Block Temp:	200℃

4.纯化抗体效价检测

起始稀释度: 1:500
效价即样品OD/空白OD ≥2.1的最高稀释度
通过ELISA检测结果得出，磷酸化多肽抗体针对磷酸化多肽A效价在512K左右，针对非磷酸化多肽B效价在512K左右。

起始稀释度: 1:500
效价即样品OD/空白OD ≥2.1的最高稀释度
通过ELISA检测结果得出，去除交叉反应的磷酸化多肽抗体针对磷酸化多肽A效价在512K左右，针对非磷酸化多肽B效价在4K左右。

起始稀释度: 1:500
效价即样品OD/空白OD ≥2.1的最高稀释度
通过ELISA检测结果得出，非磷酸化多肽B抗体针对磷酸化多肽A、非磷酸化多肽B效价均在256K左右。

5.纯化后抗体纯度检测

6.结论

通过ELISA检测效价得出，磷酸化多肽抗体针对磷酸化多肽A效价在512K左右，针对非磷酸化多肽B效价在4K左右，纯度在85%以上，获得磷酸化抗体得率达到3.5 mg以上。

相关服务