蛋白质定量方法总结

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本文总结了常见的蛋白质定量方法,包括考马斯亮蓝法(Bradford)、Folin-酚试剂法(Lowry)、BCA法,以表格的形式汇总了这三种常见蛋白质浓度测定方法的优缺点比较。

方法 原理 灵敏度 优点 缺点
Lowry法 蛋白质在碱性溶液中肽键与Cu2+鳌合,形成蛋白质-铜复合物,还原酚磷钼酸,产生蓝色化合物,蓝色深浅与蛋白质浓度呈线性关系。 25-250μg/mL 应用广泛 专一性较差,干扰物质多(如Tris缓冲剂,蔗糖,硫酸铵,巯基化物,酚类,柠檬酸等),标准曲线的直线关系不特别严格。
Bradford法 考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合呈蓝色,在波长595nm有吸收峰,在一定的范围内与蛋白质的含量呈线性关系 1-5μg/mL 操作简便迅速,消耗样品量少。 易受强碱性缓冲液、TritonX-100、SDS等去污剂的影响;标准曲线有轻微的非线性;不同蛋白质测定时有较大的偏差。
BCA法 BCA法基于双缩脲原理,碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+,BCA鳌合Cu+作为显色剂,产生蓝紫色并在562nm有吸收峰,单价Cu+与蛋白质呈剂量相关性。 0.5-20μg/mL 不易受一般浓度去污剂的干扰;抗干扰能力强。 可受螯合剂,高浓度还原剂的影响。

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