蛋白洗脱后析出问题解决

蛋白在纯化过程中出现沉淀是实验中常见的问题，将沉淀后的蛋白离心。

A泳道是蛋白沉淀后重悬形成的浊液。S泳道是蛋白浊液离心后的上清。P泳道为蛋白浊液离心后的沉淀。SDS-PAGE电泳检测显示:大部分的蛋白已经沉淀。

遇到这种情况该如何处理，钟鼎生物介绍两种解决方案，供您参考。

第一种方法是复溶沉淀的蛋白，成倍稀释重悬蛋白，并加入终浓度为1.5M NaCl和100mMDTT，轻轻摇晃5min左右。离心检测显示：

A 泳道是蛋白沉淀后重悬形成的浊液。S1泳道是蛋白浊液离心后的上清。离心后P1泳道为蛋白浊液离心后的沉淀。电泳结果显示：经过稀释处理后，可溶性蛋白的量有了比较明显的增加。

此法可部分解决蛋白洗脱后出现沉淀问题。由于在处理过程中添加了高浓度的 NaCl和DTT，避免对下游实验造成影响，需透析去除。

第二种方法是重新制备蛋白，如图上所示，红字部分是对于前面方法的一些改进，可以明显改善纯化的效果。

总结一下蛋白洗脱后沉淀，主要的原因是蛋白浓度较高，蛋白与蛋白之间相互作用机会增多，从而形成蛋白聚合体，导致蛋白沉淀。对于蛋白洗脱后沉淀的问题，钟鼎生物推荐您从以下几个方面着手去解决：

①加NaCl：用高浓度NaCl助溶蛋白，建议NaCl浓度在1-2M之间。

②加DTT洗脱：用高浓度DTT将聚合蛋白打开，使其成为单体。建议DTT浓度在100mM左右。

③加甘油/蔗糖：增加溶液粘度，降低蛋白之间碰撞几率，从而降低聚合概率。

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