细胞库检测方法

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    细胞库的检测项目包括细胞鉴别,支原体、细菌、真菌、分枝杆菌检查,内外源病毒污染检查,染色体检查成瘤性和致瘤性检查。本文将会介绍各个检测项目的细胞库检测方法,

1.细胞鉴别:

选择下述一种或几种方法对细胞进行种属和细胞株间及专属性的鉴别:

方法类别 检测方法
生物化学法 同工酶试验
免疫学检测 组织相容性抗原、种特异性免疫血清
细胞遗传学检测 染色体核型、标记染色体检测
遗传标记检测 DNA指纹图谱、STR、RELP-PCR、EPIC-PCR
其他方法 杂交法、PCR法、报告基因法等

2.支原体、细菌、真菌、分枝杆菌检查:

检测项目 考虑要点
细菌、真菌无菌检查 直接接种法:冻存细胞,取总数量 1% 或 ≥2 支(取量大者)
薄膜过滤法:混合细胞培养上清
分枝杆菌检查 培养法:罗氏培养基或 Middlebrook 7H10 培养基
豚鼠接种法:需进行结核菌素试验和解剖检查
支原体检查 培养法
指示细胞培养法(DNA 染色法)

无菌检测、分枝杆菌检测环境要求:GMP级别,B+A环境

无菌实验室

3.内外源病毒污染检查:

项目分类 检测项目 考虑要点
体外法 细胞形态观察及血吸附试验
体外不同细胞接种培养法 猴源细胞、人二倍体细胞和同种属、同组织来源的细胞
体内法接种法 鸡胚
成年小鼠
乳鼠
豚鼠 新建细胞需检测
家兔 原代猴肾细胞需检测
逆转录病毒检查 逆转录酶活性 PERT或PBRT法
感染性试验
透射电镜法 若细胞逆转录酶活性检测为阳性,则需进行透射电镜检查或 PCR 法及感染性试验
PCR 法或其他特异性体外法
牛源病毒检测 CPE PI3(Vero和MDBK细胞)、BVDV(BT细胞)、REO-3(MDBK细胞)
血吸附 PI3(Vero、BT和MDBK细胞)、REO-3(MDBK细胞)
免疫荧光 PI3(Vero、BT和MDBK细胞)、BAV-3(BT和MDBK细胞)、BPV(BT细胞)、BVDV(BT和MDBK细胞)、REO-3(MDBK)
猪源病毒检测 猪细小病毒
其他特异种属病毒检测-鼠源 检测病毒:MVM, Hantavirus, Reovirus, LCM, Sendai virus, Ectromelia virus, Adenovirus, Mouse Pneumonia Virus, MLV 指示细胞培养法(MVM病毒)
抗体产生实验(MAP、HAP)
分子检测技术
其他特异种属病毒检测-人源 检测病毒:EB, HCMV, HIV-1/-2, HTLV-1/-2, HAV, HBV, HCV, B19, HHV-6/-7/-8, HSV-1/-2 分子检测技术

内外源病毒因子检测:BSL-2 二级生物安全实验室
病毒库(十多种病毒)
细胞库(上百种细胞)
SPF级动物房
丰富的细胞、病毒培养经验

 

 

BSL-2 二级生物安全实验室

4.成瘤性和致瘤性检查:

检测项目 考虑要点
成瘤性检查 新建细胞系/株应进行成瘤性检查
已证明具有成瘤性的传代细胞不再做成瘤性检查,如:BHK21、CHO、HEK293、C127、NS0、杂交瘤细胞等
致瘤性检查 新型细胞基质,特别是成瘤性为阳性的细胞,用于疫苗生产时,需检测致瘤性。
以下细胞不要求进行致瘤性检查:
CHO、NS0、Sp2/0、低代次Vero细胞
MRC-5、2BS、KMB17、WI38及FRhL-2细胞