BCA法（bicinchoninic acid）是一种常用的测蛋白质浓度的方法，本文介绍了BCA法蛋白质定量的原理,优缺点,以及BCA的实验流程。

1.BCA法原理

BCA法基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu²⁺还原成Cu⁺，BCA鳌合Cu⁺作为显色剂，产生蓝紫色并在562nm有吸收峰，单价Cu⁺与蛋白质呈剂量相关性。可以根据待测蛋白在562nm处的吸光度计算待测蛋白浓度。

2.BCA法优缺点分析

优点	缺点
①.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，最小检测蛋白量达到0.5μg； ②.不易受一般浓度去污剂的干扰，抗干扰能力强。 ③.在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。	①.可受螯合剂，高浓度还原剂的影响。

3.BCA法实验流程

①标准曲线的绘制：取一块酶标板，按下表加入试剂。

孔号	蛋白标准溶液（μL）	去离子水（μL）	对应蛋白含量（μg）
0	0	20	0
1	1	19	0.5
2	2	18	1.0
3	4	16	2.0
4	8	12	4.0
5	12	8	6.0
6	16	4	8.0
7	20	0	10.0

②根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50：1）配制适量BCA工作液，充分混匀。

③各孔加入200μL BCA工作液。

④把酶标板放在振荡器上振荡30s，37℃放置30min，然后在562nm下比色测定。以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

⑤稀释待测样品至合适浓度，使样品稀释液总体积为20μL，加入BCA工作液200μL，充分混匀，37℃放置30min后，以标准曲线0号管做参比，在562nm波长下比色，记录吸光值。

⑥根据所测样品的吸光值，利用计算公式计算出蛋白样品的实际浓度（单位：μg/μL）。

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