转染试剂

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转染试剂

   转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。DNA转染技术的发展对现代分子生物学产生了巨大的影响。基因转染技术不仅是研究转基因和基因表达的重要工具,而且是目前基因治疗的关键步骤。理想的基因转染试剂应该具有如下特点:高效转染;安全;低细胞毒性;方法简单;省时、经济。

转染试剂过程

   目前, 将外源DNA导入哺乳动物细胞的方法大致可分为两大类,即生物方法和物理化学方法。物理化学方法中常用的有磷酸钙法、显微注射、电穿孔、脂质体介导的转染,以及最近出现的以高分子聚合物为载体的基因传递技术。生物方法则主要是以病毒作为载体,通过病毒感染的方式将外源DNA 导入到细胞中, 其中以逆转录病毒及腺病毒转染系统最为常用。

   其中病毒载体的特点是整和效率高, 可使外源基因在宿主细胞中长期表达,缺点是存在潜在的安全危险性。电穿孔法及显微注射法的特点是转染率较高,缺点是需要昂贵的仪器,前者对细胞的损伤较大,后者在导入DNA时需要一个细胞一个细胞地注射,不适合大量细胞研究的需要。

siRN转染试剂

   CodeBreaker siRNA转染试剂是Promega的专利配方产品,专门为有效转染siRNA而优化设计。这一试剂能有效促进siRNA转染哺乳动物细胞,促进基因乙默,而且毒性小,细胞死亡率低,比如转染CHO与HeLa细胞,使用CodeBrealker基因元默率达到80% 或更多,比起同类产品毒性小50%以上。这一产品操作简使,买来后即可使用,不用溶解。将CodeBreaker转染试剂与合适的siRNA二聚物混合后孵育几分钟,然后加到培养细胞即可。而且转染可在完全生长培养基中进行,不需要更换培养基或再加血清,简化了操纵步骤。CodeBreaker试剂适用的细胞HeLa、HEK293、293T、CHO和3T3细胞等。价格1800,0.4ml,以24孔板为例,按照推荐剂量可以可以做200次,6孔板大约可用40次左右。Day One细胞铺板(in complete growth medium).Day TWO

1.将CodeBreakerl Reagent加到无血清培养基中,混合均匀,室温孵育15一20分钟。
2.制成复合物: 加入siRNA到第一步中,轻微混合。室温孵育15一20分钟。
3.然后与细胞混合,37°C培育24-72 小时,

DNA转染试剂

   Transfast是一种特殊的脂质体转染试剂,由阳鸟子月类(+)-N,N[bis(2-hydroxyethy1)]-N-methy1-N-[2,3-di(tetradecanoyloxy)propyl]和It1性脂类DOPE(用于加强转染能力)且成。TransFast试剂是干脂膜,一旦水化后就形成多层脂质体,因此也就具有更多优势,尤其表现在可以传递多种生物大分子一一小的从寡聚核苷酸,到质 粒DNA 或者RNA,大到酵母人工染色体,都可用TransFast 转染试剂传递进细胞(包括原代细胞),而且脂质体可以用于体外转染的同时还可以用于体内转染。迄今为止,已经证明TransFast转染试剂在转NIH3T3,CHO,293,K562,PC12,Jurkat 和昆虫Sf9 时特别好。Transfast一个包装是1.2mg(0.4mgx3)1800左右,每个管是干脂膜,用前一天要先用无核酸酶污染的水溶解后在负20°C冻存过夜(可以反复冻融10次而不影响转染效率) ;用的时候是要用无血清培养基稀释DNA,加近量融化混匀的转染试剂,去掉培养皿中的培养基后加入转染试剂一DNA复合物,温育1小时后补加完全培养基。如果对无血清非常敏感的细胞可能就不适合。

   fxTransFast!吉构类似的脂质体转染试剂,不同处也是Tfx最大的特点就是所有的Tfx试剂含有相同浓度的阳离子脂成分,但其中融合脂类的DOPE的摩尔比例不同,故Ifx可分为Tfx-10、Tfx-20和Tfx-50.三种。这样就可以根据自己的需要选择适用的试剂。Ifx 可在l清存在下转染细胞,这有利于转染.代细胞,因为原代细胞在没有血清存在时可能会失去否性。因此使用Tfx 转染细胞需要的时间少,大多细胞系只需1个小时。Tfxo转染的细胞较多。一个包装的Tfx包含有Ifx-10、Tfx-20 和Tfx-50,可以配合不同的细胞使用。

   Transfectam是一种用于转染真核细胞的阳离子脂质体,这种脂质是由dioctadecylamidoglycyspermine( DOGS)复合而成脂多胺结构。其中的精胺基团(spermine) 通过一个肽键共价结合于脂质部分,这样spermine头部的强正电荷使整个结构高度亲和于带负电的DNA 分子,而脂质结构则包裹住整个分子,使之便于定位在细胞膜上。Transfectam试剂可以有效转染广泛的真核细胞。目前经用于进行了稳定和瞬时的转染,这些转染既包括建立的细胞系,也包括原代细胞。除了用于DNA转染,Transfectam也可用于RNA转染和体内应用。