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植物蛋白亚细胞定位

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蛋白分布在不同的细胞的不同部位,对蛋白的亚细胞定位分析可以有助于蛋白功能研究的初步判断,目前存在两种方法,其一为软件预测,其二通过实验验证。

服务优势

一站式服务
一站式服务立体化的上下游服务体系,完善的一站式服务体验。
质量保证
质量保证,ISO9001认证,高质量的实验结果交付。
仪器先进
经验丰富,博士为核心的研发团队,近二十年转基因分子分析经验。
订单查询
订单跟踪,微信实时查询订单进度,最新进展一手掌握。

一、软件预测法

亚细胞定位预测的软件有很多,我们推荐使用使用戈登生命科学研究所(Gordon Life Science Institute)”的创始人周国华教授在Nature Science上发表的预测软件Cell-PLoc。

Cell-PLoc: A package of web-servers for predicting subcellular localization of proteins in various organisms.

软件链接:http://www.csbio.sjtu.edu.cn/bioinf/Cell-PLoc-2/

二、实验验证

通过对目的蛋白的标记,例如融合绿色荧光蛋白GFP,使用扫描共聚焦显微镜激发荧光,从而对蛋白的表达分布予以确认。依据对亚细胞分布的精确度不同,亚细胞定位的实验设计也分成简化型亚细胞定位分析和内参型(细胞膜,细胞核,内质网marker)共定位分析。

对于植物蛋白的亚细胞定位分析,主要通过构建融合荧光蛋白的过表达质粒,转化烟草和原生质体瞬时表达体系确定其定位及共定位情况。

亚细胞结构图

钟鼎生物可以为科学家提供便捷的亚细胞定位技术服务,将构建好的质粒转化到农杆菌菌株LBA4404中,通过农杆菌介导法浸染烟草,以pCAMBIA1302空载为阳性对照,使用蔡司激光扫描共聚焦显微镜 (Zeiss, LSM510 Meta, Carl Zeiss AG)进行观察和拍照。

植物蛋白亚细胞定位服务项目
服务项目 服务描述 备注 周期
植物过表达载体构建 将目的基因亚克隆至过表达质粒 可转化农杆菌 2-3周
亚细胞定位 浸染烟草,激光共聚焦扫描 含对照样本 1-2周

三、实验结果

亚细胞定位结果

叶绿体荧光信号说明:
叶绿体荧光信号激发波长:640nm,发射波长:675nm
GFP信号说明:
绿色荧光蛋白GFP: 激发光488nm,发射光510nm
激光共聚焦型号:Nikon C2-ER

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