一表总结植物蛋白亚细胞定位的常用方法

本文总结了常见的植物蛋白亚细胞定位的方法，包括融合报告基因定位法、免疫组织化学定位法、共分离标记酶辅助定位法、蛋白质组学定位技术，下表就是对这4种植物蛋白亚细胞定位方法的总结。

方法	原理	优点	缺点
融合报告基因定位法	将目的蛋白基因与易于检测的报告基因进行融 合,构建融合基因表达载体, 表达融合蛋白, 然后借 助于报告基因表达产物的特征来定位目的蛋白质 。	易操作，适用性强,周期较短 ,可以应用于活体的实时定位和动态 研究 ,灵敏度高,高通量	定位结果可能与在体内条件下的蛋白质 的分布有差异 ;融合蛋白的过强或者过弱表达 都可能会使定位结果不清, 尤其对质膜等膜类蛋白的定位可能产生较大影响。
免疫组织化学定位法	利用蛋白质特异的抗体检测目标蛋白质在细胞中的位置的方法	反映的是活体状态下目标蛋白质在植物细胞的位置,是最直接、准确的定位方法	免疫组化方法实验周期长,效率低 ,技术依赖性强 ,高通量较难以实现。需要具备目标蛋白质的 特异性的抗体。
共分离标记酶辅助定位法	在细胞的特定部位, 往往有某种蛋白质的高丰 度表达或者特异性表达, 其具有的酶活性可以作为 鉴定该部位的特定标记, 这种蛋白质也就成为这一部位的标记酶。当目标蛋白与标记酶共分离后 ,再 用特异的标记抗体通过免疫印迹检测目标蛋白 ,从而进行目标蛋白的亚细胞定位 。	可以同时检测细胞组分分离的效果	一般要求用超速离心分离细胞组分 ,需要在分离过程中维持蛋白质的活性 。合适的特异性标记酶很难匹配。
蛋白质组学定位技术	蛋白质组学定位技术主要用双向电泳进行蛋白 质的分离 ,然后用质谱技术鉴定蛋白质 ,如能预先对 细胞组分进行筛分 ,则可以了解不同细胞组分中的 蛋白质成分及丰度 ,	高通量鉴定	容易出现假阳性。对纯化的质量要求较高 ,技术条件苛刻。

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