酵母双杂交系统

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酵母双杂交系统

酵母双杂交系统是利用酵母作为真核蛋白相互作用的模型,再利用诱饵质粒筛选文库或者单个已知蛋白,通过报告基因的转录鉴定蛋白的相互作用,最后筛选阳性克隆的一门技术。

酵母双杂交系统

酵母双杂交的优点:
能够快速获得相互作用的蛋白基因;
只需要单一步骤的质粒构建;
能够在体内鉴定蛋白的相互作用;
能鉴定弱小的,暂时的相互作用;
能在整个时间段积聚弱小的相互作用信号。

酵母双杂交的应用:
鉴定新的蛋白与蛋白相互作用;
鉴定蛋白级联底物;
鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响;
在已知的相互作用中鉴定干扰蛋白质(反向双杂交系统)

酵母双杂交系统补充说明

(1)发现新的蛋白质和蛋白质的新功能
酵母双杂交技术已成为发现新基因的主要途径。我们将已知基因作为诱饵,在选定的cDNA文库中筛选与诱饵蛋白相互作用的蛋白,从筛选到的阳性酵母菌株中可以分离得到AD-LIBRARY载体,并从载体中进一步克隆得到随机插入的cDNA片段,并对该片段的编码序列在GENEBANK中进行比较,研究与已知基因在生物学功能上的联系。另外,也可作为研究已知基因的新功能或多个筛选到的已知基因之间功能相关的主要方法。

(2)在活细胞的水平上检测抗原和抗体的免疫反应
利用酶联免疫(ELISA)、免疫共沉淀(CO-IP)技术都是利用抗原和抗体间的免疫反应,可以研究抗原和抗体之间的相互作用,但是,它们都是基于体外非细胞的环境中研究蛋白质与蛋白质的相互作用。而在细胞体内的抗原和抗体的聚积反应则需要通过酵母双杂交进行检测。

(3)筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响
酵母双杂交的报告基因能否表达在于诱饵蛋白与靶蛋白之间的相互作用。对于能够引发疾病反应的蛋白互作可以采取药物干扰的方法,阻止它们的相互作用以达到治疗疾病的目的。

(4)建立基因组蛋白连锁图(Genome Protein Linkage Map)
蛋白质在许多生命活动中是彼此协调和控制的,并且基因组中的编码蛋白质的基因之间存在着功能上的联系。通过基因组的测序和序列分析发现了很多新的基因和EST序列,HUA等。利用酵母双杂交技术,将所有已知基因和EST序列为诱饵,在表达文库中筛选与诱饵相互作用的蛋白,从而找到基因之间的联系,建立基因组蛋白连锁图,对于认识一些重要的生命活动有重要意义。