一.一步法原理

  One step RT-PCR采用了一步反应法完成整个RT-PCR反应，即RNA-cDNA-qPCR反应操作在同一反应体系中进行，反应过程中不需增加额外的步骤，就可完成整个RT-PCR反应，具有方便、简捷、灵敏度高、重复性好的特点，可适用于各种动物、植物、病毒RNA的qPCR检测。

二.一步法的优点

1.简便操作

2.减少污染的可能性。（RT和qPCR反应之间无需开管）。

3.另外由于得到的全部cDNA产物都一起经PCR扩增，使得一步法的灵敏度更高。

4.适用于定量PCR。

三.一步法的扩增条件

四.备注

1.用户可根据自己的情况调整优化PCR反应扩增参数。

2.退火温度可根据实际情况适当地提高或降低（50℃-65℃）。

3.延伸时间：因目的序列长度的不同而不同。

循环数：cDNA量较少时，循环数可增加为40-50次。

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