如何检测RNA

  ◎当前位置:首页>>技术服务>>基因工程定制类>>RNA合成及标记服务>>如何检测RNA

1)检测RNA 溶液的吸光度

280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时,我们认为RNA 中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要注意,当你用Tris作为缓冲液检测吸光度时,R值可能会大于2(一般应该是<2.2的)。当R<1.8时,溶液中蛋白或者时其他有机物的污染比较明显,你可以根据自己的需要决定这份RNA 的命运。当R>2.2时,说明RNA 已经水解成单核酸了。

2)RNA 的电泳图谱

RNA合成

一般的,RNA 的电泳都是用变性胶进行的,但是根据经验,如果你仅仅是为了检测RNA 的质量是没有必要进行如此麻烦的实验的,用普通的琼脂糖胶就可以了。
电泳的目的是在于检测28S和18S条带的完整性和他们的比值,或者是mRNA smear的完整性。一般的,如果28S和18S条带明亮、清晰、条带锐利(指条带的边缘清晰),并且28S的亮度在18S条带的两倍以上,我们认为RNA 的质量是好。
以上是我们常用的两种方法,但是这两种方法都无法明确的告诉我们RNA 溶液中有没有残留的RNA 酶。如果溶液中有非常微量的RNA 酶,用以上方法我们很难察觉,但是大部分后续的酶学反应都是在37度以上并且是长时间进行的。这样,如果RNA 溶液中有非常微量的RNA 酶,那么在后续的实验中就会有非常适合的环境和时间发挥它们的作用了,当然这时你的实验也就完了。

3)保温试验

保温实验是可以确认RNA 溶液中有没有残留的RNA 酶的一种方法。
方法很简单的,按照样品浓度,从RNA 溶液中吸取两份1000 ng的RNA 加入至0.5 ml的离心管中,并且用pH7.0的Tris缓冲液补充到10 ul的总体积,然后密闭管盖。把其中一份放入70℃的恒温水浴中,保温1 h。另一份放置在-20℃冰箱中保存1 h。
时间到了之后,取出两份样本进行电泳。电泳完成后,比较两者的电泳条带。如果两者的条带一致或者无明显差别(当然,它们的条带也要符合方法2中的条件),则说明RNA 溶液中没有残留的RNA 酶污染,RNA 的质量很好。相反的,如果70℃保温的样本有明显的降解,则说明RNA 溶液中有RNA 酶污染。