GST-pull down 技术原理

GST-pull down 技术原理

GST-pull down技术是在GST融合蛋白的基础上发展起来的,GST 能与谷胱甘肽特异性结合,其作为表达标签蛋白,能促进原核表达蛋白的正确折叠及可溶性表达。GST-pull down 主要包括以下 3 部分:

① 用基因重组技术构建带有 GST 标签的原核表达载体;
② 通过原核表达系统表达带有 GST 标签的融合蛋白;
③ 利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白纯化,获得高纯度的融合蛋白;再利用 GST 亲和纯化柱进行蛋白间的相互作用检测。

具体原理见图 1

GST-pull down 技术原理
   图 1 GST-pull down 的原理

注:

①获得带有 GST 标签的融合蛋白;
②将带有 GST 标签的融合蛋白亲和到谷胱甘肽层析柱上;
③获取可能与融合蛋白发生相互作用的蛋白;
④与融合蛋白发生相互作用的蛋白被亲和到谷胱甘肽层析柱上;
⑤切掉标签,洗脱得到相互作用的蛋白。

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