地高辛标记

地高辛标记

地高辛(Digoxigenin ,DIG)又称异羟基洋地黄毒甙元,是一种类固醇半抗原分子。地高辛标记的探针是一种非放射性探针。

地高辛标记实验原理

先使探针片段带有地高辛,再与抗地高辛物质发生反应,使探针上带有抗地高辛复合物的分子,然后进行其他反应。

带有地高辛标记的三磷酸脱氧尿甘(dUTP)通过缺口翻译、随机翻译或PCR等反应而使探针核酸片段带有地高辛,进一步可与带有AP、CSP等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应,使探针上带有AP等分子,催化化学或发光反应。

对于目的DNA 或RNA 来说,分子杂交后,杂交部分可通过 ELISA 实验程序加以检测,显示出杂交部分。

地高辛标记方法

DNA 探针的标记方法:
随机引物法、PCR 掺入法、寡核苷酸探针的标记方法(3' 或5'末端标记法、3' 末端加尾法)
RNA 探针的标记方法

地高辛标记特点
1、安全(产生的废物无需特殊处理)、稳定(可保存一年左右)、可重复使用;
2、灵敏度高、可标记DNA、RNA;
3、实验分析时间短。

DNA地高辛步骤:标记探针→DNA转移与固定→杂交→免疫测定→再次杂交

地高辛标记探针的显色检测

化学发光检测:通过X光片记录信号
1、使用封闭剂对杂交后 的膜进行处理,以免其被抗体的特异性吸引;
2、加入抗地高辛半抗原抗体,形成酶联抗体-半抗原复合物;
3、加入化学发光底物(CSPD或其他),使底物与复合物反应;
4、通过X光片曝光记录。