地高辛标记

地高辛（Digoxigenin ,DIG）又称异羟基洋地黄毒甙元，是一种类固醇半抗原分子。地高辛标记的探针是一种非放射性探针。

地高辛标记实验原理

先使探针片段带有地高辛，再与抗地高辛物质发生反应，使探针上带有抗地高辛复合物的分子，然后进行其他反应。

带有地高辛标记的三磷酸脱氧尿甘（dUTP）通过缺口翻译、随机翻译或PCR等反应而使探针核酸片段带有地高辛，进一步可与带有AP、CSP等各种抗地高辛抗体复合物发生免疫反应，使探针上带有AP等分子，催化化学或发光反应。

对于目的DNA 或RNA 来说，分子杂交后，杂交部分可通过 ELISA 实验程序加以检测，显示出杂交部分。

地高辛标记方法

DNA 探针的标记方法：
随机引物法、PCR 掺入法、寡核苷酸探针的标记方法（3' 或5'末端标记法、3' 末端加尾法）
RNA 探针的标记方法

地高辛标记特点
1、安全（产生的废物无需特殊处理）、稳定（可保存一年左右）、可重复使用；
2、灵敏度高、可标记DNA、RNA；
3、实验分析时间短。

DNA地高辛步骤：标记探针→DNA转移与固定→杂交→免疫测定→再次杂交

地高辛标记探针的显色检测

化学发光检测：通过X光片记录信号
1、使用封闭剂对杂交后 的膜进行处理，以免其被抗体的特异性吸引；
2、加入抗地高辛半抗原抗体，形成酶联抗体-半抗原复合物；
3、加入化学发光底物（CSPD或其他），使底物与复合物反应；
4、通过X光片曝光记录。

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