DGGE实验常见引物序列汇总

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  本文列举了微生物菌群多样性分析实验(PCR-DGGE)中常见的引物系列以及DGGE引物的相关数据,包括细菌、放线菌、古菌、真菌。供大家参考。

1.细菌

名称 序列5'→3' 长度/bp MW Tm/ºC RDP匹配情况—非特异
8F AGAGTTTGATCATGGCTCAG
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
AGAGTTTGATCMTGGCTCAG
20
20
20
6125 57.8 21114/690149
112729/706103
147961/836814
27F
27FM
AGTTTGATCATGGCTCAG
AGTTTGATCCTGGCTCAG
AGTTTGATCMTGGCTCAG
18
18
18
5485 55.02 27693/690149
139957/836814
167795/836814
50F AACACATGCAAGTCGAACG
ACACATGCAAGTCGAACG
AACACATGCAAGTCGAAC
ACACATGCAAGTCGAAC
19
18
18
17
125623/690149
148982/706103
25951/690149
145627/690149
338F ACTCCTACGGGAGGCAGC 18 482403/706103
341F CCTACGGGAGGCAGCAG 17 5239 54 561521/836814
357F CTCCTACGGGAGGCAGCAG 19 481725/706103
517F GCCAGCAGCCGCGGTAA
CAGCAGCCGCGGTAATAC
ACTCCTACGGGAGGCAGCAG
17
18
20
5200 54 499021/706103
460959/706103
480068/706103
968F AACGCGAAGAACCTTAC 17 227055/706103
1055F ATGGCTGTCGTCAGCT 16 198160/706103
341R CTGCTGCCTCCCGTAGG 17 5164 54 561521/836814
513R CGCGGCTGCTGGCACGTA 18 245632/706103
517R TTACCGCGGCTGCTGGC 17 54 585412/836814
518R ATTACCGCGGCTGCTGG 17 545228/836814
519R GTATTACCGCGGCTGCTG 18 53 541216/836814
1066R ACATTTCACAACACGAGCTG 20 21273/706103
γ-Proteobacteria特异性
1330R TAGCGATTCCGACTTCA 17 89082/706103
1385R CGGTGTGTACAAGACCC 17 46267/706103
1392R ACGGGCGGTGTGTAC 15 4632 56.3 196284/690149
1401R CGGTGTGTACAAGACCC 17 46267/706103
1492R ACGGATACCTTGTTACGACTT
GTTACCTTGTTACGACTT
GCTACCTTGTTACGACTT
GHTACCTTGTTACGACTT
 
18
18
 
5435 50.5 30582/706103
52362/706103
1495R CTACGGCTACCTTGTTACGA 20 6045 57.8 10129/690149
1513R TACGGTTACCTTGTTACGACTT
CGGTTACCTTGTTACGACTT
TACGGTTACCTTGTTACG
ACGGTTACCTTGTTACGA
CGGTTACCTTGTTACGAC
GGTTACCTTGTTACGACT
GTTACCTTGTTACGACTT
TTACCTTGTTACGACTT
GTTACCTTGTTACGACT
22
20
18
18
18
18
18
17
17
10033/690149
13181/706103
10268/706103
12207/706103
13266/706103
29502/706103
30582/706103
34392/706103
30687/706103
1521R AAGGAGGTGATCCAGCC 17 5225 57.0 13792/706103

2.放线菌

名称 序列5'→3' 长度/bp MW Tm/ºC RDP匹配情况—非特异
Act243F GGATGAGCCCGCGGCCTA 18 8519/706103-115
341F CCTACGGGAGGCAGCAG 17 51252/66797
357F CTCCTACGGGAGGCAGCAG 19 41992/54945- 439732
Act513R CCGCGGCTGCTGGCACGTA 19 39303/54945-206008
Act704R TCTGCGCATTTCACCGCTAC 20 23525/54945-5812

3.古菌

名称 序列5'→3' 长度/bp MW Tm/ºC RDP匹配情况—非特异
A21F TTCCGGTTGATCCTGCCGGA 20 2899/34593-1
A21F-2 CCGGTTGATCCTGCCGGA 18 4227/34593-1
A21F-3 CGGTTGATCCTGCCGGA 17 4316/34593-1
A25F CTGGTTGATCCTGCCAG 17 976/34593-0
A109F ACCGCTCAGTAACACGT
ACTGCTCAGTAACACGT
ACTGCTCAGTAACACG
CTGCTCAGTAACACGT
CTGCTCAGTAACACG
17
17
16
16
15
446/33890
4192/33890
4371/33890
4227/33890
4406/33890
A112F GCTCAGTAACACGTGG 16 9898/34593 -6
A333F TCCAGGCCCTACGGGG 16 9024/34593-1
A533F TGCCAGCCGCCGCGGTAA 18 15551/34593-2176
A856F TAAAAGGAATTGGCGGGGGA 20 34/34593-0
A934R GTGCTCCCCCGCCAATTCCT
GTGCTCCCCCGCCAATTCC
TGCTCCCCCGCCAATTCCT
GCTCCCCCGCCAATTCCT
GTGCTCCCCCGCCAATTC
20
19
19
18
18
17658/34593-15
17758/34593-15
19404/34593-15
19591/34593-19
17815/34593-15
A1354R TGACGGGCGGTGTGTGCAAG 20 2709/34593-21793

4.真菌

名称 序列5'→3' 长度/bp MW Tm/ºC RDP匹配情况—非特异
NS1F GTAGTCATATGCTTGTCTC (19~38)
CCAGTAGTCATATGCTTGTC (17~36)
19
20
47 8973/279,862
8048
NS2R GGCTGCTGGCACCAGACTTG (反向,与NS3 互补) 20 58 34765/279,862
NS3F CAAGTCTGGTGCCAGCAGCC (554~573) 20 58 2656
NS4R CTTCCGTCAATTCCTTTAAG (反向,与NS5互补) 20 48
NS5F CTTAAAGGAATTGACGGAAG (1131~1150) 20 48
NS6R GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC (反向,与NS7互补)
CAGACCTGTTATTGCCTC
24
18
57
48
NS7F GAGGCAATAACAGGTCTG
ATAACAGGTCTGTGATGC
GAGGCAATAACAGGTCTGTGATGC (1412~1436)
18
18
24
48
46
57
17364
NS8R TCCGCAGGTTCACCTACGGA (1769~1788)
GCAGGTTCACCTACGGA
20
17
56
49
4324
EF4F GGAAGGGRTGTATTTATTAG
GGAAGGGATGTATTTATTAG
GGAAGGGGTGTATTTATTAG
20
20
20
2656
3036
fung5R GTAAAAGTCCTGGTTCC 17 3257
EF3R TCCTCTAAATGACCAAGTTTG 21
fung ATTCCCCGTTACCCGTTG 18
FF1 AACTTAAAGGAATTGACGGAAG 22
FR1 GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC 24
ITS1F TCCGTAGGTGAACCTGCGG 19
ITS4R TCCTCCGCTTATTGATATGC 20
GC clamp CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGTCCCGCCGCCCCCGCCCG
CGCCCGCCGCGCCCCGCGCCCGGCCCGCCGCCCCCGCCCC
CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGCGGGGGCACGGGGGG
40
40
40
Muzyer

MW=A碱基数×312+C碱基数×288+G碱基数×328+T碱基数×303-61。
R=A/G,Y=C/T,M=A/C,K=G/T,S=C/G,W=A/T,H=A/C/T,B=C/G/T,V=A/C/G,D=A / G / T,N=A/C/G / T。
古菌域包括嗜泉古菌界(Crenarchaeota)、广域古菌界(Euryarchaeota)和初生古菌界(Korarchaeota);细菌域包括细菌、放线菌、蓝细菌和各种除古菌以外的其它原核生物;真核生物域包括真菌、原生生物、动物和植物。

5.18S rRNA

名称 引物序列 Tm
NS1 GTAGTCATATGCTTGTCTC 49
CNS1 GAGACAAGCATATGACTACTG 55
NS2 GGCTGCTGGCACCAGACTTGC 65
NS3 GCAAGTCTGGTGCCAGCAGCC 65
NS4 CTTCCGTCAATTCCTTTAAG {62}
NS5 AACTTAAAGGAATTGACGGAAG 55
NS6 GCATCACAGACCTGTTATTGCCTC {72}
NS7 GAGGCAATAACAGGTCTGTGATGC {72}
NS8 TCCGCAGGTTCACCTACGGA 59
TW9 TAAGCCATGCATGTCT
TW10 GCGGTAATTCCAGCTCC
TW11 GGAGTGGAGCCTGCGGCT
TW12 AAGTCGTAACAAGGTTT 53
CTW12 AAACCTTGTTACGACTT 53
NS17 CATGTCTAAGTTTAAGCAA 55
NS18 CTCATTCCAATTACAAGACC 60
NS19 CCGGAGAAGGAGCCTGAGAAAC 74
NS20 CGTCCCTATTAATCATTACG 61
NS21 GAATAATAGAATAGGACG 50
NS22 AATTAAGCAGACAAATCACT 57
NS23 GACTCAACACGGGAAACTC 64
NS24 AAACCTTGTTACGACTTTTA 58
NS25 GTGGTAATTCTAGAGCTAATACT
CNS25 ATGTATTAGCTCTAGAATTACCAC
NS26 CTGCCCTATCAACTTTCGA
CNS26 TCGAAAGTTGATAGGGCAG
NS1.5R TCTAGAGCTAATACATGC(T/C)G 52
NS2.8R GGCCCTCAAATCTAAGGATT 53
CNS2.8R AATTTGCGCGCCTGCTGCAA 57
NS3.2R CGTATATTAAAATTGTTGAC 45
CNS3.3R GACTACGAGCTTTTTAACGT 51
CNS3.5R TTTCGCAGTAGTTTGTCTTA 49
NS3.6R CAAACTACTGCGAAAGCATC 53
CNS3.6R AATGAAGTCATCCTTGGCAG 53

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