微滴式数字PCR技术服务案例

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微滴式数字PCR案例分析(以食品安全为例)

  采用多重ddPCR,针对牛肉类食品掺假情况检测,将检测牛肉的探针记为FAM,而检测的其他肉类探针标记为HEX。检测样品中若含有牛肉成分,则FAM通道能检测到相应的荧光;反之,则 FAM通道无法检测到荧光。若样品中含有鸡肉、鸭肉或猪肉中任何1种成分,则HEX通道有荧光检出;反之,则没有荧光检出。用已知肉源样本做比较实验,其中Ⅰ反应加牛和鸡的DNA,Ⅱ反应加牛和鸭的DNA,Ⅲ反应加牛和猪的DNA,Ⅳ反应同时加入牛、猪、鸡和鸭的DNA。

多重荧光定量PCR
图1 多重荧光定量PCR

  图1为利用荧光定量PCR扩增优化后的多重数字PCR体系,分析多重扩增体系的可扩增性。在含有相应DNA模板的扩增体系中,均呈现相应的扩增曲线。当体系中同时含有牛、猪、鸡和鸭的DNA时,因猪、鸡和鸭的探针都是同一荧光标记(HEX),因此对猪、鸡和鸭的扩增是同一扩增曲线。多重荧光定量PCR分析结果表明了多重扩增体系的可行性。

多重数字PCR扩增
图2 多重数字PCR扩增

  图2表明,在FAM通道中,4个反应体系中都扩增出牛肉信号;在HEX通道中,Ⅰ-Ⅳ反应中分别扩增出相应的样品信号。在2个荧光通道中,阳性微滴和阴性微滴区分很明显,后期分析中,满足数字PCR的分析要求。

二维散点图
图3 二维散点图

  二维散点图谱分析结果,如图3所示,从扩增结果看,2个通道中的反应均得到良好扩增,且信号值满足分析要求。

  根据以上数值,可分析出不同样品的掺假情况。
  荧光PCR不能区分牛肉制品中是故意掺假还是加工过程中无意的带入,而微滴式数字PCR,从单拷贝数上设计引物,快速、便捷并且具有一定的抗干扰能力。