双分子荧光互补载体介绍

  ◎当前位置:首页>>技术服务>>生物大分子互作研究>>bifc技术服务>>双分子荧光互补载体介绍

  双分子荧光互补(BIFC)技术是能直观、快速反应蛋白质在细胞内相互做用的技术,是验证和探索蛋白质互做的常用方法。双分子荧光互补是利用的荧光蛋白的两个部分再次组装在一起时形成完整的荧光蛋白而发光的原理,因此直接将荧光蛋白的两个部分连入载体构建模板,将需要验证的两个目的蛋白基因序列构建至模板载体,通过目的蛋白与荧光蛋白片段融合表达,当目的蛋白之间互做,荧光蛋白片段就会结合成完整的荧光蛋白而发光,进而反应了目的蛋白之间的互做。QQ技术支持

  构建于BIFC载体的荧光蛋白片段,是将荧光蛋白在某些特定的位点切开的,形成了不发光荧光的2个多肽,靠近N端的成为N片段(N-fragment),另一个是C片段(C-fragment)。N片段与C片段在细胞内共表达或体外混合时,不会自发靠近,相互结合成完整的荧光蛋白,需要借助与他们融合表达的蛋白间的相互作用,N片段和C片段才能在空间上相互靠近互补。因此融合了由荧光蛋白N片段和C片段的载体模板是BIFC实验的关键。

常用BIFC载体种类

  1. 哺乳表达体系
pBiFC-VC155与pBiFC-VN173质粒常配套使用

  pBiFC-VC155 pBiFC-VN173
骨架质粒 pCMV-HA pFlag-CMV
质粒用途 BIFC实验 BIFC实验
质粒大小 4088 bp 5216 bp
载体标签 HA FLAG
报告基因 VC155 Venus (1-172)
5’端测序引物 CMV-F CMV-F
3’端测序引物 EBV-Rev hGH-PA-R
抗性基因 Ampicillin Ampicillin

载体图谱:

pBiFC-VN155(I152L)

骨架质粒 pMyc-CMV
质粒用途 BIFC实验中可替代pBiFC-VN173,与pBiFC-VC155配套使用
适用体系 哺乳动物细胞
质粒大小 4289 bp
载体标签 Myc
报告基因 Venus (1-154, I152L)
抗性基因 Ampicillin

pBiFC-bFosVC155

骨架质粒 pMyc-CMV
质粒用途 BIFC实验
适用体系 哺乳动物细胞
质粒大小 4352 bp
载体标签 HA
报告基因 c-Fos(118-211)-Venus(155-238)
抗性基因 Ampicillin
5’端测序引物 CMV-F
3’端测序引物 EBV-Rev

2. 植物表达体系BIFC载体

pCE-BiFC-VN173和pCE-BiFC-VC155
pSPYCE(M)和pSPYNE173
pCCFP-X和 pX-CCFP
pX-NYFP和pNYFP-X