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RNA pull-down是检测RNA结合蛋白与其靶RNA相互作用的主要技术之一,是近年来研究IncRNA、circRNA与蛋白质相互作用的主要手段。
      其原理是是使用体外转录法标记生物素RNA探针,然后与细胞或组织的提取液进行孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物与链霉亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成份分离。复合物洗脱后,通过WB实验检测特定的蛋白是否与RNA相互作用,或者运用质谱筛选RNA结合的未知蛋白。




RNA Pull down技术路线


RNA Pull down技术路线




RNA Pull down服务介绍

RNA Pull down 检测服务
服务项目 服务内容 周期 交付内容 价格
制备正义链反义链探针 体外转录法 2周 WB 检测结果;
检测质谱图;
实验报告
在线询价
RNA pull down 捕获目标目标RNA及其结合蛋白 2周
Western blot 验证靶蛋白类型 1周
LC-MS 实验组、阴性对照 2周

RNA Pull down检测服务样品要求

建议选择顺丰快递,干冰运输,以避免样本降解。为保证样品及时处理,请避免样品在周末或法定节假日到达实验室。请在送样前与您的客户经理沟通样品送达时间。实验样品剩余样品钟鼎生物默认不做返还,请您注意保留备份。如需返还务必请在实验开展前书面说明并通知销售经理,且样品返还可能会产生额外的运输费用。希望得到您的理解!

样品类型 样品量 运输标准 注意事项
细胞样品 5*107个/份 干冰运输 悬浮细胞常温离心(1000-1500 rpm,5 min),常温离心收集细胞。贴壁细胞用胰蛋白酶消化后,吹打收集,PBS洗涤细胞,去除多余培养基和胰蛋白酶。开盖液氮速冻15 min,-80℃保存。
组织样品 >2g 干冰运输 用解剖刀等迅速切成小碎块,约200 mg,放入2.0 ml离心管中,开盖液氮速冻15 min,-80℃保存。
注:解剖刀处理组织的时间尽量控制在1min以内。
液氮速冻是必须开盖,以防炸裂。
总蛋白 2mg/ml 干冰运输 每组量100ug,最少做五组,正义链实验组对照组,反义链实验组对照组,磁珠蛋白组,总蛋白量要500ug以上



案例展示

1.案例1

rna pull down案例1

Lane M:Protein Marker
Lane 1:Bioeast Mag-SA+蛋白
Lane 2:标记正义链探针+Bioeast Mag-SA+蛋白
Lane 3:标记反义链探针+Bioeast Mag-SA+蛋白

2.案例2

rna pull down案例2

Lane M:Protein Marker
Lane 1:Bioeast Mag-SA+对照组蛋白
Lane 2:Bioeast Mag-SA+正常组蛋白
Lane 3:Bioeast Mag-SA+过表达组蛋白
Lane 4:Bioeast Mag-SA+过表达组蛋白+标记正义链探针
Lane 5:Bioeast Mag-SA+正常组蛋白+标记正义链探针
Lane 6:Bioeast Mag-SA+对照组蛋白+标记反义链探针

3.生信分析

GO功能注释和分类

图4 GO功能注释和分类

KEGG Pathway通路注释和分类

图5 KEGG Pathway通路注释和分类

String蛋白质互作网络分析

图6 String蛋白质互作网络分析

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