纳米抗体天然文库

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1、产品概述

  纳米抗体天然文库以10只1-2岁羊驼(空白动物,未注射过免疫原)的血清为材料,经PBMC分离、RNA提取及cDNA反转录,扩增获得VHH基因片段,并构建至噬菌粒载体pComb3XTT中。库容≥2.0×109,VHH片段有效插入率≥99%,VHH抗体的多样性良好,正确率≥93%。

2、试剂盒组成

组分 规格
1 天然抗体文库 2.5×1013 pfu/ml,0.15 ml(3次)
2 E.coli K12 TG1 host strain 0.2 ml
3 pComb3XTT-F 1 nmol
4 pComb3XTT-R 1 nmol
5 M13KO7 辅助噬菌体 1×1012 pfu/ml, 1 ml
6 Anti-M13 Antibody (HRP), Mouse Monoclonal 100 μg
7 Anti-HA-HRP抗体 50 μl

2.1 天然抗体文库

2.5×1013 pfu/ml 。(pfu=plaque forming unit i.e., virions), 0.15 ml。

2.2 E.coli K12 TG1 host strain

[F´traD36 proAB lacIqZΔM15] supE thi-1Δ(lac-proAB)Δ(mcrB-hsdSM)5(rK–mK–)。
添加了终浓度20% 的甘油。 短期存放于-20℃,长期存放(>30天),建议置于-80℃。0.2 ml。

2.3 扩增、测序引物

pComb3XTT-F:5‘-AGACAGCTATCGCGATTGCAG-3’,1 nmol
pComb3XTT-R:5‘- GCCCCCTTATTAGCGTTTGCCATC -3’,1 nmol

2.4 M13KO7 辅助噬菌体:1×1012 pfu/ml, 1 ml

M13KO7 是 M13 噬菌体。其具有 P15A 的复制起点和 Tn903 卡那霉素抗性基因,这两个片段插入 M13 的复制起点。 M13KO7 在没有噬菌粒 DNA的条件下也能复制。当存在一个携带有野生型的M13 或 f1 复制起点的噬菌粒时,单链噬菌粒可以完整包装,并分泌到培养基中。该特性使其便于生产用作突变和测序的单链噬菌粒 DNA。 M13KO7携带卡那霉素抗性标记。

2.5 Anti-M13 Antibody (HRP), Mouse Monoclonal:100 μg。

Phage ELISA及Soluble ELISA时,1:20000稀释使用。

2.6 Anti-HA-HRP抗体:50 μl

Phage ELISA及Soluble ELISA时,1:10000稀释使用。

3、存储

-20℃保存,避免反复冻融。

4、实验流程

实验流程

5、注意事项

1、噬菌体容易污染,实验过程中需要设置阴性对照。
2、使用带有滤芯的枪头及一次性的摇瓶。
3、实验室消毒液交替使用。

6、实验案例

1、库容大:库容≥2.0×109

库容

2、VHH片段有效插入率≥99%:随机挑取30个单克隆,进行菌液PCR验证,均为阳性克隆。

3、VHH抗体的正确率高,多样性良好:对阳性克隆进行测序验证,并进行进化树分析,正确率≥93%,多样性良好。

菌液PCR检测

图1菌液PCR检测

测序结果分析

图2测序结果分析

进化树分析

图3进化树分析

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