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兔单克隆抗体制备技术服务

 兔单克隆抗体以其具有高亲和力、强特异性、可以识别在小鼠体内没有免疫原性抗原等优点。钟鼎通过高纯抗原免疫新西兰大白,配合噬菌体展示技术,构建噬菌体展示兔免疫单链抗体库,通过重组抗体表达平台,获得高表达的兔单克隆抗体稳定表达细胞株。


钟鼎兔单抗定制服务特色



自主研发的可溶蛋白表达技术帮助表达高纯度,高可溶性蛋白抗原。
极具竞争力的价格。
1vs1专属私人客服,实时汇报项目进展。
抗原-抗体研发-抗体测序-抗体表达的一站式服务,节省您的宝贵时间。

兔单克隆抗体制备流程 

兔单抗定制流程

服务详情 

步骤 周期 交付材料 询价
1.动物免疫 详情请在线咨询或拨打热线400-066-8086
A.4次动物免疫
B.效价检测
C.PBMC和脾脏淋巴细胞分离
D.RNA提取
E.cDNA制备
8周 4次免疫效价检测数据
4次免疫之后的cDNA
2.构建噬菌体抗体库  5折
A.利用免疫的cDNA,扩增出scFv基因片段,构建M13单链丝状噬菌体展示抗体免疫文库。
B.抗体库质量:
(1)scFv抗体片段有效插入率﹥99%
(2)抗体库容量达到109次方
C.从文库中随机挑取96个克隆,对其中30个克隆测序,分析scFv抗体片段的多样性和正确率,保证正确率≥80%,另外提供30个克隆用于测序验证。
4-6周 提供质检报告与抗体库
①完整的项目报告和原始数据,报告需包含实验流程、分析评估实验的主要操作步骤、以及详细的实验结果;
②共30个文库随机克隆的甘油菌和测序引物;
③噬菌体展示抗体免疫文库的Kit(包含文库甘油菌1ml × 10支和文库噬菌粒质粒10 μg);
3.抗体库筛选  5折
A.筛选方案确定:根据项目实际情况,选择不同的筛选方案,如竞争筛选,固相筛选,液相筛选,细胞筛选,负筛选等筛选方法。
B.淘选: 对抗原蛋白进行SDS-PAGE分析验证,并进行生物素标记;针对生物素化靶点蛋白,利用链霉亲和素预包被的ELISA Plates,淘筛免疫文库;抗原施压法进行2-3轮淘筛,确定充分富集且靶点筛选组的滴度要远高于对照筛选组。
C.结合筛选:选择从Output克隆中,分别挑取单克隆进行阳性克隆鉴定。经培养和Phage Rescue后,进行Monoclonal Phage ELISA检测。
D.测序分析:鉴定出抗原结合强阳性的scFv抗体克隆,测序分析,比对序列制作进化树,选择序列独特的克隆。
E.表达验证:少量表达阳性scFv克隆,利用Soluble ELISA检测对靶点抗原的特异性结合能力。
4-6周 5个以上的特异性克隆
4.抗体表达纯化
A.将抗体基因克隆至真核表达载体。 3-4周 高纯度抗体100-500μg
5.亲和力测定
采用Biacore 测定抗体的亲和力
采用Nicoya LSPR 测定抗体的亲和力
采用Fortebio octet 测定抗体的亲和力
1周
1周
1周
亲和力测定数据
6.抗体人源化(通过自主开发软件AbsYs分析抗体可变区并进行抗体人源化设计。)
A.识别FR、CDR、关键残基、PTMs。
B.通过同源比对,考虑可变区一致性及相似性、关键残基、PTMs、稳定性等因素,选择更好的人源抗体Germline FR作为模板,与CDR 重组,设计初始人源化抗体。
C.分析抗体序列和结构,确定需要回复突变的关键残基,设计不同数量的回复突变VH。
D.将人源化基因克隆至真核表达载体,转染293瞬时表达获得100-500μg 纯化抗体。
E.结合活性及亲和力检测。
6-8周 至少一个人源化抗体(亲和力、表达量与原抗体相当)

兔单抗的应用 

1、在生物标记物开发中,用于癌症的IHC临床诊断与研究,用于蛋白修饰研究领域,如蛋白的磷酸化,以及其他生命科学研究领域。

2、在治疗抗体药物开发中,由于兔单克隆抗体自身的高亲和力,在临床上免去体外亲和力的步骤,减少临床使用量,同时减少了由于大量使用抗体而带来的副作用。


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