ELISA检测方法

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双抗夹心法

·双抗体夹心法
 
1.将抗体包被在固相载体上。
2.如样品中含有抗原,则结合为抗原抗体复合物。
3.再加入酶标记抗体,则结合为抗体-抗原-酶标记抗体复合物。
4.酶催化底物并显色。

双抗体夹心法原理图

·双抗原夹心法
 
1.将抗原包被在固相载体上。
2.如样品中含有抗体,则结合为抗原抗体复合物。
3.再加入酶标记抗原,则结合为抗原-抗体-酶标记抗原复合物。
4.酶催化底物并显色。

双抗原夹心法原理图

提示:
双抗夹心法常用于抗原、蛋白等检测。
配对抗体3种形式:
①只有一个多抗
优点:成本低,耗时短。
缺点:灵敏度低,成功率低。
②一个多抗(包被),一个单抗(酶标记)
优点:成本适中,耗时适中(4-6个月),成功率较只有一个多抗高。
缺点:稳定性一般。
③单克隆抗体
优点:灵敏度高,稳定性好。
缺点:耗时久(6-8个月),成本高。

竞争法

以测小分子抗原为例,为标本中的小分子抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中小分子抗原量越多,结合在固相上的酶标抗原愈少,因此阳性反应呈色浅于阴性反应。

竞争法原理图

提示:
竞争法常用于小分子、lgA、lgG、lgM等检测。

间接法

间接法是检测抗体最常用的方法,其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相抗原结合的受检抗体,故称为间接法。

ELIMA能检测的内容包括:
 
大分子(多肽等)、小分子(农药、抗生素、代谢产物等);
动植物病害检测;
血清蛋白浓度;
医疗诊断;
食品安全诊断等。