ELISA实验常见问题解析

  ◎当前位置:首页>>技术服务>>免疫检测技术服务>>ELISA检测>>ELISA实验FAQ

ELISA实验FAQ

ELISA试剂盒

1、如何提高ELISA检测实验的稳定性?

(1)首先,确保原料一致性,不得随意更换原材料;
(2)其次,包被原需要加入包被稳定剂,有助于保证包被条件一致;
(3)最后,所有ELISA检测实验参数不得改变

2、如何排除ELISA检测非特异性反应?

(1)首先,确定抗原抗体的来源及特异性;
(2)其次,抗体与其他无关抗原蛋白的反应性;
(3)最后,实验操作规范性,阴性对照很重要。

3、ELISA中显色淡,灵敏度低是什么情况?

(1)试剂盒运输时间过长,且气温过高造成酶的活性降低:
试剂盒运输过程加足量冰袋并尽可能缩短运输时间。
(2)加样量不足,移液时抽吸排放过快,有气泡、或吸头内残留液体过多:
经常校正移液器,注意吸头要与移液器吻合。移液不宜过快,排放要完全。
(3)显色剂加量不足,或加入顺序颠倒:
按照说明书要求,先加入A液,后加入B液,并保证加入量。
(4)样品用NaN3防腐,影响了酶的活性:
不可以使用NaN3防腐。
(5)恒温箱温度达不到37℃
①经常注意水箱中合适的水位
②在保证水不没过酶标板的前提下,使水位尽量高,以保证反应温度。
③注意控制恒温箱温度,尽可能让其稳定在37℃左右,尽量避免频繁开关恒温箱门。

4、实验出现假阳性多,本底高甚至花板该怎么办?

(1)污染:
注意更换吸头,尽可能避免污染,对先加样后加酶的操作,加酶时要注意吸头不要接触标本,造成污染,当可能造成污染时,一定要更换吸头,切记侥幸心理。
(2)整个操作时间过长、造成反应时间不同(第一孔与最后一孔反应时间相差很悬殊)。气温高时更明显:
加快操作速度,尽量不要堆积多块板子操作
(3)手工洗板方式不正确:
洗板时,垂直加入洗液,保证一定的冲击力;洗液要注满板孔,并保证30-60秒的浸泡时间。
(4) 显色完成后没有终止反应:
显色完立即终止反应。

5、出现白板的原因以及应对措施?

(1)一般来说,要么忘记加酶,要么忘记加显色液:严格按照说明书操作
(2)酶或A、B液被污染失效:防止组分被污染,注意保存
(3)把终止液当A液:注意液体组分加样顺序。