胶体金试纸条开发服务案例

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实验报告

摘要
将一抗(单链抗体)标记到胶体金,将抗原固定到试纸条上,通过竞争法定性检测待测标本中的抗原。要求:检测灵敏度达到5μg/mL。

1 试剂和耗材

名称 公司 名称 公司 名称 公司
A α2b注射液20μg/mL、金标抗体:单链抗体、质控线包被蛋白:标签抗体、检测线蛋白:抗原 客户提供 吸水纸、底板、玻纤(金标释放垫)、玻纤(样品层析垫)、硝酸纤维素膜 Millipore 胶体金溶液、封闭液、金复溶液 南京钟鼎生物

 

2 主要实验仪器材料

仪器名称 公司 仪器名称 公司
离心机:Mini-14k型 杭州奥盛仪器有限公司 喷点系统(划膜仪):HM3030型、斩切机:ZQ2002 型 上海金标

 

3 实验步骤

3.1 标记
取1支1.5mL离心管用超纯水清洗两遍,吸取1mL胶体金加入管中,向管中加入14μL0.2M碳酸钾后震荡离心管使其混合均匀,加入8μg单链抗体,混匀后反应20min。加入200μL10%BSA封闭反应20min。在11000r/min 转速下离心20min。弃去上清,用2mL 金复溶夜将沉淀复溶后铺在6mm×300mm的金垫上干燥。

3.2 点膜
将客户提供的抗原稀释至2mg/mL,用点膜仪喷点在NC膜上作为检测线,将客户提供的标签抗体稀释至0.6mg/mL,喷点在NC膜上作为质控线,55℃烘干箱干燥2h。

3.3 组装检测
在底板上从上到下依次粘贴吸水纸、NC膜、金垫(两层)、样品层析垫,用斩切机切成4mm宽的试纸条装入卡壳中用以检测。

3.4 金标抗体的验证及灵敏度测试
检测方法是用样品稀释液将A α2b注射液按照1:1的比例稀释,然后取稀释后的样品60μL滴于试纸条加样孔上,10min后判读结果。

胶体金
图1 A α 2b不同浓度以及阴性对照结果
1:样品稀释液
2:0.5 μg/mL A α2b
3:2.5 μg/mL A α2b

图1左1试纸条CT线都比较明显,2号T线位置未完全抑制,3号基本完全抑制,试纸条检测重组人干扰素α 2b的灵敏度在5μg/mL左右。

3.5 加速稳定性实验
用以上方法制作的试纸条放入37℃环境下3天和7天后,再拿出来检测,结果如图2和图3。

胶体金试纸开发服务
图2 试纸条37℃3天检测结果
1:2.5 μg/mL A α 2b
2:0.5 μg/mL A α 2b
3:样品稀释液
胶体金试纸开发服务
图3 试纸条37℃7天检测结果
1:样品稀释液
2:0.5 μg/mL A α 2b
3:2.5 μg/mL A α 2b

图 2、3 中可以看出试纸条在 37℃下保存 7 天对检测性能没有太大影响。

4 结果讨论分析
经过以上实验,试纸条检测重组人干扰素α 2b注射液的灵敏度在5μg/mL左右,试纸条在4℃密封条件下能稳定保存 6个月左右。