抗体检测方法

  ◎当前位置:首页>>技术服务>>抗体相关技术服务>>抗体重组表达技术服务>>抗体检测方法

抗体检测方法 在线QQ技术支持2

1、免疫酶技术

抗体检测

  免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性和酶对底物显色反应的高效催化作用有机结合而成的免疫学技术。由于它特异性强,灵敏度高,现已广泛用于筛选和鉴定单抗。

⑴、可溶性抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)

⑵、全菌抗原的ELISAS

⑶、用全细胞抗原的ELISA

⑷、抗体捕捉ELISA试验
本法用抗BALB/c小鼠Ig的多克隆抗体捕捉待检样品中的McAb,再依次加抗原、酶标多克隆抗体及底物显色。该法是常用的ELISA中较理想的一种

⑸、ABC-ELISA试验
ABC-ELISA是在常规ELISA原理的基础上,增加了生物素(Biotin)与亲和素(Avidin)间的放大作用。亲和素有4个亚单位组成,对生物素有高度的亲合力。生物素很易与蛋白质共价结合。因此,结合了酶的亲和素与结合有抗体的生物素发生反应即起到了多极放大作用。

⑹、Dot-ELISA试验
免疫斑点试验(Dot-ELISA)是以硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜为固相载体,进行抗原抗体反应的免疫检测手段。该法采用不溶性底物(如DAB,或4-氯萘酚或AgNO3等),其与相应标记物(HRP、AP、胶体金)作用形成不溶性产物,呈现斑点状着色,从而易于判定结果。根据所用的标记物不同,可分为HRP 免疫斑点试验、AP免疫斑点试验和免疫金银斑点法等。

⑺、免疫组化染色法
该法主要用于检测针对细胞抗原成分的McAb,常用的方法是间接免疫过氧化物酶试验(IIP,indirect immunoperoxidase)及APAAP技术。其结果用光镜或倒置显微镜检查。

2、免疫荧光技术

抗体检测

  免疫荧光技术可用于多种抗原的杂交瘤抗体检测,如细胞性抗原(包括细菌和动物细胞)、感染细胞中的病毒抗原和膜抗原等。其操作简单、敏感性高,可直接观察抗原定位等优点,在McAb的筛选与鉴定上具有重要的应用价值。 ⑴、间接免疫荧光法 ⑵、细胞的膜荧光染色 完整的活细胞的细胞膜,抗体不能透过。如果细胞在4℃操作,则荧光染色仅限于细胞膜。必须注意死细胞常以非特异性方式吸附大量荧光抗体,因此试验过程中要保证细胞的高活力。

3、间接血凝试验

抗体检测

  间接血凝试验又称被动血凝试验(PHA),是目前应用较广的检测方法之一。本试验是以包被可溶性抗原的红细胞作为指示系统,当被检抗体与包被在红细胞上的抗原产生特异性反应时,导致红细胞呈凝集现象。可见,该法具有灵敏、快速、容易操作和无需昂贵仪器等优点,而且经改用醛化红细胞以后,克服原来重复性差的缺点:
  ⑴、 多糖抗原的间接血凝试验
  ⑵、可溶性蛋白抗原的间接血凝试验

4、放射免疫测定

抗体检测

  放射免疫测定是用放射性同位素标记抗原或抗体,以检测相应抗原或抗体的定量方法。在筛选和鉴定单抗时常用抗原固相法,即用抗原包被聚乙烯微板,借以检测样品中的McAb。