一、免疫学测定的类型

　依据不同的分类标准，免疫学测定的分类体系也不尽相同。本书依据免疫方法学进行分类，每一种类型的原理及程序有可能相似。然而，其检测的结果可能不同。例如，改变某些关键条件，同一方法就可能由检测抗原变为检测抗体，反之亦然。即试验的程序是相似的，但产生的结果是不同的。类似的这样问题很复杂，虽然有些可事先考虑到，但在实际工作中还会遇到一些困难。主要发生在如何选择一种恰当的测定方法。本文着重介绍几种免疫学测定方法。

(1)抗体捕捉试验；(2)抗原捕捉试验；(3)双抗体夹心试验。

在抗体捕捉试验中，抗原吸附在固相支持体上，标记抗体再与之结合，经洗脱后，测定保留在固相支持体上的抗体数量。抗原捕捉试验是先把抗体吸附在固相支持体上，标记抗原再与之结合，未结合的抗原被洗脱掉，然后测定抗原的结合数量。再将抗原结合在第一抗体上，最后是测定结合在抗原上的第二抗体的数量。

　

二、试验条件的选择

任何免疫学测定都有四种变化，及抗体过剩、抗原过剩、抗原竞争和抗体竞争四种情况。抗体过剩或抗原竞争试验是用于抗原的检测和定量分析，而抗原过剩或抗体竞争试验用于抗体的检测和定量分析。三种免疫学测定与上述四种变化结合在一起，就形成了12种免疫学测定法。然而，不是每一种结合都能产生一种有效的免疫学测定法，实际上只有6种方法可以使用。下面将讨论这16种方法的常规操作程序。

原则上讲，在选择每种免疫学测定时都需要考虑的唯一因素为是否有可靠的抗体（多克隆抗体、亲和纯化的多克隆抗体、单一的单克隆抗体和群单克隆抗体） 和是否有可靠的纯化或没有纯化的抗原，下表列举上述变化而选择的试验程序。

	抗体的种类	抗原的纯度	选择的试验方法
抗原定性和定量分析	多克隆抗体	纯抗原	1.抗原捕捉试验（抗原竞争型） 2.抗体捕捉试验(抗原竞争型)
		不纯抗原	1.抗体捕捉试验(抗体过剩型) 2.其他免疫试验，但需要结合另一种技术
	亲和纯化的多克隆抗体	纯抗原	1.双抗体夹心试验 2.抗原捕捉试验(抗原竞争型) 3.抗体捕捉试验(抗原竞争型)
		不纯抗原	1.双抗体夹心试验 2.抗体捕捉试验(抗体过剩型)
	一种单克隆抗体	纯抗原	1.抗原捕捉试验(抗原竞争型) 2.抗体捕捉试验(抗原竞争型)
		不纯抗原	1.抗体捕捉试验(抗体过剩型) 2.其他免疫试验，但需要结合另一种技术
	两种或多种单克隆抗体	纯抗原	1.双抗体夹心试验 2.抗原捕捉试验(抗原竞争型) 3.抗体捕捉试验(抗原竞争型)
		不纯抗原	1.双抗体夹心试验 2.抗体捕捉试验(抗体过剩型)
抗体定性和定量分析	亲和纯化的多克隆抗体	纯抗原	1.抗体捕捉试验(抗原过剩型)
		不纯抗原	需结合其他方法
	一种单克隆抗体	纯抗原	1.抗体捕捉试验(抗原过剩型)
		不纯抗原	需结合其他方法
	两种或多种单克隆抗体	纯抗原	1.抗体捕捉试验(抗原过剩型)
		不纯抗原	需结合其他方法

(一)抗体的检测和定量分析

如果可以获得纯抗原或近似纯抗原，那么可用抗体捕捉试验对抗体进行定性和定量分析。在试验过程中，先将纯化或部分纯化的抗原吸附在固相支持体上，检测溶液中的未知含量抗体结合在抗原基质上，结合在固相上的抗体数量通过与标记的二级试剂(如抗免疫球蛋白抗体)共同孵育，加以测定。在多数情况下，通过上述方法对抗体进行定性和定量分析。

(二)抗原的检测和定量分析

检测和定量分析抗原的最有效方法是双抗体夹心试验。这种方法快速、可靠，而且还可用于多数蛋白抗原的相关水平检测。然而，本法需要针对抗原不同位点的两种单克隆抗体或者是需要亲和纯化的多克隆抗体。

如果无法获得这两种抗体，那么定量分析抗原的另一有效的方法是竞争试验法。在竞争试验中，纯抗原或近似纯抗原样品时必要的。本试验有两种选择途径：
①第一种是抗原捕捉试验，已知量的标记抗原与含量未知量的抗原检测混合在一起，然后将该混合液与吸附在固相上亚饱和量的抗体孵育，检测液中含量高的抗原将减少标记抗原的结合量。
②第二种是抗体捕捉试验，纯抗原或部分纯抗原结合在固相支持体上，检测液中的抗原与标记抗体混合在一起，然后一起加入到固相支持体上，检测液中含量高的抗原将阻止标记的抗体与固相结合。

如果纯抗原或部分纯抗原无法获得，那么检测抗原的有效方法是抗体捕捉试验。将检测液结合在固相上，然后用饱和量的标记抗体检测抗原。在没有纯抗原的情况下，而且又必须检测微量抗原，那么只有结合其它技术，以便从背景中分别出被检抗原。常用的其他方法包括免疫沉淀技术、免疫印迹技术和细胞染色法。

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