胶体金技术注意事项

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胶体金技术注意事项

用于标记和包被的抗原抗体要先纯化。对于产业化应用的抗原抗体大部分可以满足胶体金方法的要求,确定抗原抗体是否能应用于胶体金方法。
相对来说,胶体金方法对抗原抗体的要求是比较高的,因为不管是胶体金标记还是NC膜包被都是基于物理吸附作用,这种结合过程是相对脆弱的,很容易受到干扰。

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  • 对于重组抗原来讲,基于镍柱纯化的蛋白会含有大量的咪唑,而微量的咪唑就足以使胶体金聚集、死金、沉淀;而以包涵形式表达的蛋白往往需要高浓度的尿素来溶解,尿素对胶体金的破坏也是非常严重的。
    在蛋白的保存过程中,可能会加入一些甘油、蔗糖之类的物质作为保护剂,而这些保护剂由于其强亲水性,对胶体金方法的标记和包被都会产生不利的影响。
  • 对于天然抗原来讲,如果天然抗原浓度和纯度能够满足要求,是可以使用的。
  • 对于多抗来说,应该避免某些纯化方法(如硫酸铵沉淀法)所产生的强电解质和高盐成分。
  • 对于单克隆抗体,一般来说igG1亚型标记效果最好,igG2a、igG2b、igM、igA这些类用于包被会好点。
    如果用于标记或者包被的抗原抗体有上述的干扰物质存在,建议通过超滤或透析去除;透析液选择尽量偏离蛋白等电点的PH缓冲液。比如20mM Tris-Hcl(PH8.5)或者20mM Tris-甘氨酸(PH8.5)的缓冲液用于透析,使用于大部分抗原抗体。