重组抗体表达服务常见问题解析

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重组抗体表达服务常见问题解析

如何提高抗体的稳定性?

优化洗脱条件,可以从高的PH逐渐降低;纯化的样品要及时中和,甚至一边纯化一边中和;纯化实验过程中样品低温制备和保存;添加蛋白保护剂比如甘油、吐温;抗体浓度较高时需要及时稀释,避免高浓度聚沉的风险。

如果用哺乳体系进行表达的话,选择293或cho有什么区别?

CHO细胞即中国仓鼠卵巢细胞,是目前表达外源蛋白最多最成功的细胞之一。该细胞属于成纤维细胞,是一种非分泌型细胞,自身很少分泌内源蛋白,因此有利于目的蛋白的纯化分离;相较于其他细胞类型,CHO细胞是治疗性蛋白生产的主要宿主细胞的原因如下:
(1)能在化学成分限定和无血清悬浮培养中稳定生长,
(2)该细胞基因组信息明确,在人类致病病毒应答方面表现出合理的安全性,
(3)能够表达与人相似的翻译后修饰。
此外,CHO细胞表达系统的最重要优势之一是能够容易的得到基因改造的细胞。然而,因为糖基化模式与人类不完全相同,导致CHO细胞产生的重组蛋白在某些时候仍然表现出免疫原性。
HEK293细胞是真核蛋白表达常用的细胞之一,它具有以下优势: 更快的生长速度,更高的生长密度、转染效率高,表达后修饰更接近人体蛋白的结构,可能会有潜在的人病毒污染。

钟鼎表达重组抗体服务的优势是什么?

可变区和高变区:
(1)基于生物信息学的氨基酸序列分析,
(2)基于结构生物学的同源建模以及计算机辅助设计和抗体改造
(3)基于空间结构的序列分析的重要氨基酸的回复突变
恒定区:
重链、轻链载体骨架,人源、鼠源多物种可供选择。
丰富的载体表达哺乳动物抗体恒定区。

重组抗体的载体如何选择?

重组抗体表达载体和细胞最好是配套的,比如293T细胞对应PCDNA3.1载体,有EBNA改造的细胞对应有Orip复制起点的载体,还有就标准细胞株和标准质粒,例如Thermo的293F对应PCDNA3.4载体等。

如何提高重组抗体的产量?

选择高表达系统,制备无内毒素、高超螺旋质粒,细胞状态要好,时间允许可以表达优化,延长表达时间,提高纯化得率。

表达的重组抗体是否具有活性?

真核表达系统较原核表达的优势就是活性较好,理论上大部分都是有活性的,但是不同的样品稳定性不一样,需要以实际实验结果为准。

是否能高通量筛选重组抗体?

可以做高通量抗体表达及筛选,利用深孔板震荡仪培养,一次可以做大量的表达,可以通过ELISA效价检测筛选,可以通过微量纯化获得20-50ug抗体。