本产品是用于定量分析T2和HT2毒素的酶联免疫试剂盒。试剂盒包含96孔或48孔实验所需的耗材，包括标准品。需要实验室配备酶标仪。

检测范围:谷物 (玉米,小麦,硬质小麦,燕麦,大麦)和饲料.

样品前处理:谷物和饲料:粉碎,甲醇水提取,过滤,稀释.

检测时间: 20分钟 (不包括样品前处理时间).

检出限   谷物和饲料: 0.025 ppm

特异性
组分	交叉反应率 %
T2 Toxin HT2 Toxin	100 72

检测原理   该测定在已用抗T2毒素抗体包被的微孔中进行。在预混孔中，将酶标记的T2毒素和标准溶液或样品混合，然后转移到包被有抗T2毒素抗体的微孔板中。在孵育过程中，游离的T2毒素和酶标记的T2毒素竞争固相上的抗T2毒素抗体结合位点。然后在洗涤步骤中除去任何未结合的酶耦合物和T2毒素分子。通过添加固定量的底物，将无色的色原体转化为蓝色产物，添加终止试剂会导致颜色从蓝色变为黄色。用酶标仪在450nm处测量吸光度。溶液颜色的深浅与标准品/样品中的T2毒素浓度成反比。

2.提供的试剂

提供的试剂
微孔板:包被有抗T2毒素抗体,装于带有干燥的铝箔袋中	预混合孔板:未经包被的空白孔板(微孔板可独立拆分，单独使用)
终止液: 1瓶，白色盖子	酶耦合物：1瓶。
洗涤缓冲液10x: 1 瓶, 50ml。	发展液: 1瓶。
洗涤缓冲液10x: 1 瓶, 50ml。	发展液: 1瓶。
T2 毒素标准品: 5瓶，浓度分别为: 0 ppm；0.025ppm；0.08 ppm；0.4 ppm；1 ppm .

3.未提供的试剂及设备

未提供的试剂及设备
霉菌毒素提取液 A或 70% 甲醇	甲醇
NaCl	去离子水或蒸馏水。
天平	粉碎机或研磨机
振荡器（可选）	滤纸 (Whatman 1)
20~200 ul 可调微量移液器	50~300 ul 多通道可调微量移液器 (可选)
吸水纸	酶标仪（450nm）

4.使用者注意事项

(1)该产品仅供体外诊断使用.
(2)部分试剂含有防腐剂。终止液含有硫酸并且有刺激性；标准品中包含甲醇而易燃，小心处理试剂，避免接触皮肤、眼睛和黏膜.

5.样品处理

- 充分混匀待测样品。
- 细细粉碎样品。
- 称取粉碎后的样品，选择下表中描述的任一选项:

样品量	NaCl	提取溶液
50 g	10 g	250 ml 70% 甲醇
5 g	1 g	25 ml 70% 甲醇
50 g	/	250 ml 70% 甲醇, 4% NaCl
5 g	/	25ml 70% 甲醇, 4% NaCl

6.分析步骤

(一)实验前准备工作

⑴使用前将所有试剂置于室温，并在室温下保持至 少1小时。
⑵使用后立即将剩余试剂放于 2～8℃ 环境中。
⑶不要更改实验步骤，特别是：
   ①不要延长第一步的孵育时间；
   ②不要在高于25℃和低于18℃的环境中孵育微 孔板 ；
   ③孵育期间不要摇动微孔板；
   ④使用精确的微量移液器和配套枪头。
⑷一旦开始实验，应不间断的完成所有实验步骤。
⑸ELISA结果的可重复性在很大程度上取决于洗涤 微孔板的效率和均匀性；始终遵循说明书中的所 述程序。
⑹每个标准品和样品使用新的一次性吸头，以避免 交叉污染。
⑺不要让吸头接触微孔中已有的液体。
⑻在所有孵育期间避免阳光直射。不能使用密封胶 带覆盖微量滴定板。

7.实验步骤

(1).预先安排好实验流程，记录好每个标准品/样品的位置，如果条件允许，建议做平行实验。把未使用的微孔条放回原来有干燥剂的铝箔袋 中，并用夹子夹好同时也准备好同样数量无包被抗体的空白预混合孔. 注意：建议在每次测定中不超过48孔包括标准品）；如果不使用多道移液器，则建议在每次测定不超过16孔（包括标准品）
(2). 添加 100ul 酶耦合物到每个预混合孔中；
(3). 添加 50ul 标准品/样品到相应的预混合孔中；
(4). 使用微量移液枪，混合每个预混合孔的内容物 （移液器上下三次），立即将100ul转移到相 应的抗T2毒素抗体包被的微孔中；
(5). 室温孵育10分钟；
(6). 不要延长第一步的孵育时间，在孵育过程中不要摇 动微孔板；
(7). 洗板
①- 孵育结束后倒掉孔中的液体.
② - 用稀释后的洗涤缓冲液填满微孔，倒掉微孔中的液 体.重复清洗步骤三次.
③ - 将微孔板倒扣在吸水纸上轻轻敲打，清除残留的液 滴.
不要让微孔变干.
(8). 添加100ul发展液到每个微孔中，并彻底混合几秒钟.
(9). 室温下避光孵育 10 分钟.
(10).添加50ul 终止液到每个微孔中，并彻底混合几秒钟.
(11).在450nm 处测定吸光度值.在15分钟内读数.

8.结果计算

   将每个标准品和样品的吸光度值除以标准0（B0）的吸光度并乘以100；因此，最大结合（B0）等于100％，吸光度值以百分比表示

根据每个样品的B/B0值和T2毒素标准品浓度绘制标准曲线

将每个样品的B/B0值插入校准曲线中得到相应浓度.

T2毒素标准品的浓度(ppm)已经考虑了样品的稀释因子.

如果样品被进一步稀释5倍以获得0.125-5ppm的剂量范围，则将校准曲线上读取的结果乘以因子5

9.标准曲线示例

10.结果评估

在结果出具之后，有必要验证测定性能。通过将获得的数据与试剂盒中给出的数据进行比较来执行验证。如果值超出给定的数据，建议检查试剂盒的失效日期，吸光度记录的波长以及所用的程序。如果没有出现操作错误，请联系我们的技术支持。

11.试剂盒参数

㈠分析参数

Bo 吸光度	≥ 0.7 OD450nm
B/Bo 50%	0.04 – 0.15 ppm

㈡分析性能

基质	Cut off ppm	LOQ ppm
玉米	≤ 0.025	0.025
全麦小麦	≤ 0.025	0.025
白小麦粉	≤ 0.025	0.025
燕麦	0.040	0.050
硬质小麦	≤ 0.025	0.025
大麦	≤ 0.025	0.050
饲料	0.050	0.050
回收率%（添加T2毒素0.1 - 1 ppm ）		玉米: 109±13
		全麦小麦: 125±18
		白小麦粉: 116±14
		燕麦: 116±10
		硬质小麦: 119±17
		大麦: 117±12
		饲料: 113±21

12.责任

使用试剂盒评估为阳性的样品必须使用确认方法重新 测试。对由于不正确使用该试剂盒而导致的任何客 户损失以及因结果而采取的任何行动不承担任何责任。

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